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蒲公英多糖的药力作用研究-医学论文写作指导

时间:2012-06-27 11:13来源:作者:点击:
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1   材料与仪器
  1.1   材料蒲公英,采自黑龙江省五大连池市。
  1.2  器材UEIP503、UEOS503型中空纤维膜组件,752N紫外可见分光光度计。
  2  方法
  2.1  多糖提取工艺流程蒲公英根干粉→热水浸提→离心分离→微滤→超滤分离→乙醇沉淀→脱蛋白→真空干燥→蒲公英粗多糖。
  2.2  超滤及其预处理浸提液在超滤前用0.45 μm微滤膜除去粗提液中的固形物以降低对超滤膜的污染。控制超滤压力为0.08 MPa,将蒲公英多糖的浸提液先用孔径10 KDa的超滤膜进行超滤处理。滤过液继续采用6KDa的超滤膜进行超滤处理,分别测定10 KDa超滤膜的截留液、6 KDa超滤膜的截留液、6 KDa超滤膜的滤过液中的总糖、还原糖含量,计算各部分多糖含量,分析蒲公英多糖的大致分子量分布情况。图1显示了各部分的比例和含量。
  2.3  多糖含量的测定总糖含量的测定采用蒽酮-浓硫酸法[4];还原糖含量的测定采用3,5-二硝基水杨酸比色法[4,5]。多糖含量=总糖含量-还原糖含量[6]
  2.4  蛋白含量的检测蒲公英粗多糖溶液经木瓜蛋白酶和三氯乙酸(TCA)脱蛋白后,测定其在260 nm和280 nm处的吸光值[7]。
  2.5  多糖清除·OH的测定清除·OH试验的方法:采用Fenton反应体系[8]。清除率E(%)计算公式为:E(%)=[A0-(Ax-Ai)/A0 ]×100%
  式中:A0为空白对照液的吸光度;Ax为加入多糖溶液后的吸光度;Ai为不加显色剂H2O2 多糖溶液的本底的吸光度。
  2.6  多糖清除O2-·的测定多糖清除O2-·的试验采用邻苯三酚自氧化法[9]。清除率E(%)计算公式为:E(%)=(A对照-A样品)/(A对照-A空白)式中:A空白空白组的吸光度;A对照为对照组的吸光度;A样品为多糖液的吸光度。
  3  结果
  蒲公英多糖清除·OH的作用分别配5 mg/ml DP1、DP2溶液,根据Fenton反应,其对·OH的清除率见表1及图2。由表1、图2可知,蒲公英多糖DP1、 DP2对·OH有清除作用,并随着多糖加入量的增加清除率上升,即清除率与多糖的用量之间存在一定的量-效关系。其中DP2的清除率高于DP1,当浓度达到5 mg/ml时 DP2的清除率达到61.21%而DP1为49.78%。
       
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