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黄芪注射液对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的作用效果研究-呼吸科优质

时间:2014-04-24 14:46来源:作者:点击:
呼吸科优质护理论文    妇科护理论文    医学护理毕业论文   护理学论文发表
1  器材
  1.1  药品与试剂
  黄芪注射液由成都地奥九泓制药厂提供,批号:国药准字Z51021776;ICAM-1试剂盒、HSP70试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供。
  1.2  动物
  健康雄性SD大鼠65只,体质量(250±20) g,平均250 g(陕西省中医研究院实验动物中心提供,许可证号:08-45)。
  2  方法
  2.1  分组与给药 随机分为3组, A 组:空白组(n=5),只暴露腹主动脉,然后关闭腹腔;B组:模型组(n=30),尾静脉注射等容量生理盐水30 min后阻断腹主动脉,阻断腹主动脉30 min后开放再灌注; C组:黄芪注射液预处理组(n=30) ,尾静脉注射黄芪注射液(12 ml/kg)30 min后阻断腹主动脉,阻断腹主动脉30 min后开放再灌注。神经功能评分:再灌注4,8,12, 24, 48 h及72 h,由一名不了解分组情况的观察者对动物后肢运动神经功能评分。
  2.2  采用Zivin[3]法复制模型实验动物大鼠以2%戊巴比妥钠按照40 mg/kg体质量进行腹腔麻醉后,仰卧位于手术台上,妥善固定,术中烤灯辐射加热,保持直肠温度38℃,腹部剪毛,取腹正中切口,无菌条件下开腹暴露并分离腹主动脉,手术分离腹主动脉至肾动脉水平,在肾动脉起始部远端用无创伤血管夹夹闭腹主动脉,阻断腹主动脉后,股动脉搏动立即消失并且大鼠下肢发绀。
         缺血30 min后移去血管夹,开始再灌注,检查主动脉及腹腔无明显损伤出血,关闭腹腔,伤口外涂红霉素软膏,即制成脊髓缺血再灌注损伤模型。术后常规青霉素40万单位肌肉注射,2次/d。分笼饲养,给予标准饲料喂养,供给清洁水,自由摄取。室温保持25℃左右,通风良好。
  2.3  神经功能评分  评估标准:大鼠运动神经功能评分根据Faden(1987)8点分级法和Behrmann (1993) 5点分级法加以改进[4]。0分:后肢无自发运动,压夹后肢无反应;1分:后肢无自发运动,但夹后肢有嘶叫、逃避等反应;2分:后肢有自发运动,但不能负重站立;3分:能站立但不能行走;4分:能行走,但不能控制踝关节或足,只能靠膝关节或足内侧行走,且不稳定,腹部着地;5分:能行走,前后肢步态协调,后肢负重明显改善,腹部不着地,但数趾拖步;6分:能行走,仅一或二个足趾拖步,快速转弯时稍有不稳;7分:正常步态和行走。
  2.4  ICAM-1 和HSP70免疫组化的测定脊髓ICAM-1免疫组织化学的测定:  将脊髓组织石蜡切片作ICAM-1 和HSP70免疫组化的测定。具体操作步骤按照说明书进行。图像分析:  ICAM-1着色以胞浆为主,细胞核/浆染成棕黄色为阳性细胞。应用HIMAS-2000多媒体彩色病理图文分析系统,进行图像分析。10倍镜下进行阳性血管观察,40倍镜下进行阳性血管计数。每张切片随机观察5个测试区的阳性血管数,取其均值。
  测量HSP70免疫组织化学染色阳性神经细胞数:每张切片在脊髓灰质前角处随机选取5个不重叠视野,对阳性细胞进行二态化图像修正,400 ×高倍镜下用计算机算出每个视野的阳性神经细胞数,取其平均数。本实验观察发现,黄芪注射液组再灌注后4,8,12,24,48, 72 h及7 d的神经功能评分明显高于模型组;与模型组相比,黄芪注射液组脊髓组织损伤减轻,形态基本正常的前角细胞较多。从而表明黄芪注射液对大鼠脊髓缺血再灌注损伤有明显的保护作用。
     
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