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金花茶种子抗癌活性的有效部位及量效关系研究-肛肠科中医护理论

时间:2014-04-24 14:46来源:作者:点击:
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  1  材料与方法
  1.1  金花茶的提取分离金花茶种子采集于广西南宁,由广西林业科学研究院高级工程师梁盛业鉴定。取金花茶种子100 g,粉碎后用95%乙醇回流提取3次,3 h/次,合并提取液,减压浓缩成浸膏,加适量水分散,依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取,各萃取液分别浓缩至浸膏,得醋酸乙酯部分、正丁醇部分和水溶部分,减压浓缩并真空干燥后得到各部分的浸膏,各浸膏用DMSO配成各浓度溶液备用。
  1.2  细胞系和培养液人宫颈癌HeLa S3细胞株和人前列腺癌PC3 细胞株 ,HeLa S3细胞培养于含有10%热灭活小牛血清的RPMI 1640培养液中,PC3细胞培养于含有10%热灭活小牛血清的DMEM培养液中,37℃,5% CO2,饱和湿度条件下培养。选取对数生长期细胞进行实验。
  1.3  体外细胞增殖抑制实验噻唑蓝比色法 (MTT) 检测细胞生长情况,将HeLa S3细胞和PC3 细胞分别种于96孔培养板,每个孔细胞数为5×103,分别培养于RPMI 1640培养液和DMEM培养液中,在37℃,5% CO2条件下培养24 h。培养24 h后,以PBS冲洗细胞,然后分别加入新的培养液和系列浓度的待测样品。经初步筛选后确定实验组设6个药物浓度组,每组药物的终浓度分别为5,10,20,40,80,160 μg/ml,对照组加入同样浓度的二甲基亚砜(DMSO),培养24 h。培养结束前4 h每孔加入20 ml MTT溶液(5 mg/ml),离心,弃上清液,加入200 ml DMSO充分溶解结晶物,酶标仪测490 nm处吸光度值。因为吸光度值与培养液中活细胞数成正比,所以通过吸光度值可以计算细胞存活百分率。
  1.4  统计分析以对照组中细胞存活率为100%,样品组与其相比所得相对值为细胞存活百分率,实验结果以±s表示,采用统计学t检验进行组间比较分析,P< 0.05为差异有显着性。
  2  结果
  金花茶不仅有较高的观赏价值,而且具有一定的药用价值和营养价值。其叶和花为壮族民间用药,主要用于治疗咽喉炎、痢疾、高血压病、便血、月经不调[2,3]。金花茶叶是一种含有丰富营养成分的山茶,含有多种微量元素和氨基酸,而咖啡碱含量低[4]。我们在对山茶属植物抗肿瘤活性的研究中发现,金花茶种子的乙醇提取物具有较强的抗肿瘤作用。本研究将通过考察金花茶种子乙醇提取物不同萃取部位对人宫颈癌HeLa S3细胞和人前列腺癌PC3 细胞增殖的影响,探讨其抗癌活性的有效部位及量效关系。
  用浓度分别为5,10,20,40,80,160 μg/ml的金花茶种子的不同提取物处理HeLa S3细胞和PC3 细胞,观察不同浓度的样品对HeLa S3细胞和PC3 细胞增殖的影响。结果发现金花茶种子乙醇提取物、正丁醇部分和水溶部分都显示了较强的抑制HeLa S3细胞和PC3 细胞增殖的作用(见表1),其IC50分别为85.88,67.62,55.71 μg/ml和63.06,56.20,68.53 μg/ml。其中,正丁醇部分和水溶部分的高浓度组(160 μg/ml)对HeLa S3细胞和PC3 细胞增殖的抑制率均达60%以上,且抑制率随样品浓度的加大而增加(各浓度组与对照组相比差异有统计学意义,P<0.01),呈现出剂量效应关系
  我们采用重组人雌(孕)激素受体基因酵母法对金花茶种子乙醇提取物进行了雌(孕)激素活性试验,证明它们都具有明显的雌(孕)激素活性,同时又有较强的抗雌(孕)激素活性,对雌(孕)激素受体具有双向调节作用,是一种非常理想的选择性雌(孕)激素调节剂[5,6],引发我们对其抗激素相关性肿瘤( GHDT)的研究。因为具有雌激素样作用的药物能直接作用于雌激素受体,通过影响激素平衡来抑制某些激素相关性肿瘤。
      
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