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　　有研究者曾建立离体大鼠心肌缺血再灌注Langendorff模型于体外研究缺血再灌注［6］。我们用捐赠人尸睾丸建模，所得结果对研究人类实质器官缺血再灌注损伤更具指导意义。已有研究报道，缺血再灌注可引起细胞内Ca2+堆积，上调NOS活性，从而持续生成过量NO［7］。而高浓度NO可能通过多种途径诱导细胞凋亡。大量NO与相互作用生成细胞毒性物质ONOO-和OH-，损伤DNA；过量NO与FeS复合物结合，抑制许多FeS酶的正常功能，导致线粒体功能损伤和细胞DNA合成障碍；NO能刺激TNF相关的凋亡诱导配体表达，将死亡信号传递到胞内，激活半胱天冬蛋白酶系统，上调p53，抑制NFκB活化促进细胞凋亡［7］。
　　1  材料与仪器
　　26复方丹参注射液［20 g·（10ml）-1，每毫升含相当于原生药丹参Salvia miltorrhiza Bge，降香Dalberga odorifere T. chen各1g，批号001208，华西医科大学制药厂提供］；高渗枸橼酸盐嘌呤液。SDJS-2型精密输液器即蠕动泵（浙江新昌国康仪器厂），小型三用水浴箱。
　　2  方法
　　2.1  睾丸离体缺血再灌注损伤模型建立
　　26对睾丸离体后立即置于4℃高渗枸橼酸盐嘌呤液中，剔除鞘膜及多余结缔组织，精索动脉插管固定，4℃高渗枸橼酸盐嘌呤液灌洗至精索内静脉流出液清亮后，备用。其中6对睾丸立即取材作正常对照（12只）。其余20对睾丸中，每两只分别分配到缺血再灌注组（20只）和复方丹参组（20只）。缺血再灌注组用4℃高渗枸橼酸盐嘌呤液低温灌洗至精索内静脉流出液清亮后置于250 ml该保存液中4℃冷存12 h，再以500 ml保存液复温至37℃行循环灌注6 h；复方丹参组用含1.5 mg·ml-1 复方丹参注射液的高渗枸橼酸盐嘌呤液同样操作。
　　2.2  组织学及酶组织化学
　　染色常规石蜡切片HE染色，观察睾丸组织学结构。新鲜冰冻切片按NADPHd组织化学法［2］显示一氧化氮合酶（NOS），阳性反应为蓝色沉淀。用Nikon Eclipse E600光学显微镜观察，并用Spot Advanced 3.0.4.软件采集图象，Image-Pro Plus 4.1.0.9软件计算灰度值（Integrated optical density，IOD，= Area×Average Density）。
　　2.3  睾丸组织细胞凋亡检测
　　睾丸组织石蜡切片采用DNA原位缺口末端标记（TUNEL）技术染色［3］显示凋亡细胞。阳性细胞的细胞核被染成棕黄色。计数睾丸生精细胞凋亡指数（即每500个细胞核中的阳性细胞核的数目）。每克睾丸组织加5 ml生理盐水，制备20%睾丸组织匀浆，离心取上清，硝酸盐还原酶法［4］测定NO含量。检测试剂盒购自南京建成生物工程公司。
　　3  结果
　　正常对照组曲细精管圆形或椭圆形，各期生精细胞分布正常，间质中血管完整，内皮细胞层呈扁平梭状。 缺血再灌注组血管内皮细胞肿胀脱落，曲细精管萎缩，基膜与生精上皮明显分离，生精细胞排列紊乱，数量明显减少，间质水肿。复方丹参组形态结构基本正常，仅见少数血管内皮细胞肿胀。各组睾丸组织细胞凋亡指数、NOS活性和组织匀浆NO含量比较 缺血再灌注组睾丸组织细胞凋亡指数、NOS活性和组织匀浆NO含量均显着高于正常对照（P<0.05,0.05，P<0.001）；复方丹参组各项指标均显着低于缺血再灌注组（P<0.01,0.01，P<0.001），与正常对照组相比，细胞凋亡指数和组织匀浆NO含量仍较高（P<0.01），NOS活性无显着差异。