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1  材料与仪器
　　1.1  药物与试剂雷公藤多苷生药粉（GTW），江苏美通制药有限公司提供。菟丝子黄酮粉，西安昂盛生物技术有限公司提取。批号：20070914；规格：10％。原位杂交探针合成，天津灏洋科技生物技术有限公司；原位杂交试剂盒、二氨基联苯胺（DAB）显色试剂，Sigma公司产品。
　　1.2 仪器VL-4S型超净台，珠海市再鑫仪器有限公司；RM2245石蜡切片机，德国莱卡；EG1150自动包埋机，德国莱卡； OLYMPUS-BX51,CH30显微镜，日本奥林巴斯公司产品；IMAGER-Pro Plus6.0彩色病理图像分析系统。
　　1.3  动物清洁级雌性SD大鼠，4周龄，体质量（60±10）g，每组12只。购自河南省实验动物中心。饲养1周后无异常开始实验。
　　2  方法
　　2.1  分组及给药动物根据体质量随机分3组，分别为空白对照组（羧甲基纤维素钠CMC-Na）、阳性对照组（GTW）、干预组（菟丝子黄精颗粒剂组）。空白组予1%CMC-Na溶液；阳性组予9 mg/kg GTW混悬液（用CMC-Na溶液配制）；干预组予GTW混悬液加菟丝子黄精溶液（1 g/kg）。各组均连续灌胃12周后处死动物，检测指标。
　　2.2  指标检测
　　2.2.1  卵巢组织病理乙醚麻醉后取卵巢，放入当日配制的10％甲醛固定液中。常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片，普通光镜下观察并图像分析。
　　2.2.2  原位杂交法检测卵巢组织中smad4 mRNA表达探针序列：smad4 mRNA  5-TGCTG AAGAT GGCCG TTTTG GTGGT GAG-3。检测步骤：具体参照说明书进行。原位杂交检测结果判定：组织石蜡切片经原位杂交、DAB显色后，可在光镜下观察到mRNA阳性产物呈黄色或棕褐色颗粒。采用Imager-pro Plus 6.0图像分析系统分析阳性细胞表达强弱，测试各级卵泡中卵母细胞、颗粒细胞以及卵泡膜细胞中染色阳性细胞的灰度值。每组检测不少于6张切片。
　　3  结果
　　卵巢组织病理改变空白组卵巢体积较大，卵泡生长活跃，卵泡形态、数量正常。颗粒细胞层次多，排列整齐，卵泡液含量多。黄体发育好。雷公藤多苷组各级卵泡数量减少，部分成熟卵泡颗粒细胞层次减少，排列紊乱、疏松。菟丝子黄精组各级卵泡数量多，生长活跃，成熟卵泡多，体积大，颗粒细胞排列整齐。闭锁卵泡较少。黄体发育良好。
　　卵巢次级卵泡数结果：空白组与GTW组间差异有统计学意义（P＜0.05），与干预组间差异没有统计学意义（P＞0.05）。GTW组与其他两组间差异（P＜0.05）。卵巢黄体数比较各组间差异没有统计学意义（P＞0.05）。推测雌性幼鼠服用雷公藤多苷造成卵巢组织病理改变，其中smad4 mRNA表达的下降可能是损伤途径之一。干预组的Smad4 mRNA表达较GTW组高，说明菟丝子、黄精可以促进被GTW所抑制的Smad4 mRNA表达。