脊柱及创伤类论文    创伤骨科论文      骨科护理论文     医学护理论文
　　1  材料与仪器
　　1.1   试剂
　　デタミナ-LPO由日本协和メデツクス株式会社提供，SOD试剂盒由北京北方生物技术研究所提供。
　　1.2  仪器薄层层析板
　　（美国Sigma公司），超低温冰箱（日本三洋SIM-F124），高速离心机（德国Heraeus STRATOS HAS 15.94型），超速离心机（瑞士Centrikon T-1055型），层析用自动部分收集器　HELIRAC（瑞士LKB公司）。
　　2  方法
　　2.1  分组以临床上经过各种检查确定临床诊断的肺癌患者和包括糖尿病的血管损伤性疾病患者作为研究对象，正常对照选择了健康、体检证明肝功能、肾功能、胸部X线及血尿常规均正常的20名大学生自愿者。分组如下：①肺癌组16例，男9例，女7例，年龄为42～68岁，平均51岁；②血管损伤组12例，男9例，女3例，平均年龄47～72岁，平均56岁；③正常组20例，男10例，女10例，年龄21～24岁，平均年龄22岁。
　　2.2   标本制备
　　每人清晨空腹采血16 ml加入乙二胺四乙酸（终端浓度为0.05 mmol/L）抗凝、抗氧化，以3 500 r/min离心提取血浆，在冰箱0℃条件下保存备用。用哈贝尔的重层超速离心分离法，以40 000 r/min离心26 h分离血浆内低密度（d=1.063～1.18），以40 000 r/min离心28 h分离血浆内高密度脂蛋白（d=1.18～1.21）。
　　2.3  血浆内LPO的测定
　　八木别法测定各组血浆的低密度脂蛋白内过氧化脂蛋白含量。用放射免疫法测定各组血浆内超氧化物歧化酶（SOD）的活性。
　　2.5   标本中各种脂类的薄层层析
　　2.5.1  脂类提取
　　取标本0.8 ml（0.6 ml血浆+0.2 ml蒸馏水）加甲醇2 ml，加三氯甲烷1 ml混匀，加醋酸2滴混匀后再加入三氯甲烷1 ml，加蒸馏水1 ml混匀，高速离心2 000 r／min，10 min。吸取下层在真空泵内连续吸引干燥8～12 h。
　　2.5.2  展开液的制作及薄层层析分析
　　展开液由石油乙醚75 ml+乙醚25 ml+乙酸1 ml组成。薄层层析板先用三氯甲烷洗1次，在自然条件下干燥12 h后，在层析板上取一边打5个格，用三氯甲烷100 μl溶解脂质在薄层上滴注，以能吸干为度。将层析板放入含有展开液的展开槽中展开，展开至层析板顶部2～3 cm时停止展开，层析板进行显影。
　　2.5.3  显影和摄影
　　析板放入显影槽（碘化）5～10 min后取出进行摄影。初步判定各组氧化脂质的峰线位置和大致浓度。
　　3  结果
　　正常对照组与血管损伤组比较P<0.01，与肺癌组比较P<0.05，均具有统计学意义。氧化低密度脂蛋白含量在肺癌组与血管病变组之间有测定数值的变化，但无统计学差异。如表2所示，血管损伤组与正常对照组比较有明显差别，具有统计学意义（P<0.05），说明在血管损伤性疾病发生时血浆内SOD值有明显上升趋势。正常对照组血浆、极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和极高密度脂蛋白的薄层层析板中几乎看不到任何氧化物质，而肺癌组和血管损伤组的低密度脂蛋白与正常组有不同分布，可以初步推测在血管病变性疾病和肺癌发生过程中出现的氧化低密度脂蛋白可能来自不同的物质。
　　肺癌时肿瘤细胞增生活跃并伴毛细血管的增多使肺的脂质代谢异常活跃。同时肿瘤组织的某些代谢产物和分泌的某些具有生物活性的物质可直接或间接地影响细胞膜上感受器功能活性，从而形成肺癌时所特有的血脂及脂蛋白氧化修饰［4，5］。薄层层析实验表明，肺癌和血管损伤性疾病形成过程中过氧化低密度脂蛋白具有不同特异性变化，因此推测两种氧化低密度脂蛋白的产生来源可能不同，具体机制在进一步研究中。