中华实验眼科杂志投稿      医学核心期刊    医学期刊目录     护理学论文发表
　　1  仪器与试药
　　日本岛津LC-10AT VP高效液相色谱仪,SPD-10AT型紫外检测器,CLASS-VP V5.02色谱工作站,CQX25-06超声清洗仪。感冒清热颗粒及阴性样品,由广西某药业有限公司提供；5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号1523-200203)。甲醇为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。
　　2  方法与结果
　　2.1  测定波长的选择
　　5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液经紫外分光光度计扫描,在291.8 nm处有最大吸收峰,故选择292 nm为测定波长。
　　2.2  色谱条件
　　色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱(Hypersil C18 ,4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：甲醇-水(44∶56)；检测波长为292 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：室温。
　　2.3  系统适用性试验
　　分别吸取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、阴性样品溶液和供试品溶液各20 μL,注入液相色谱仪,得色谱图(见图1)。试验结果表明,供试品和对照品溶液有一保留时间相同的色谱峰,并且阴性样品在5-O-甲基维斯阿米醇苷峰附近无干扰,5-O-甲基维斯阿米醇苷与其它组分达到基线分离。分析时间适宜,理论板数定为不低于5 000。
　　2.4  对照品溶液的制备
　　精密称取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适量,置棕色容量瓶中,加50%甲醇制成每1 mL含20 μg的溶液,即得。
　　2.5  供试品溶液的制备
　　取装量差异项下的本品内容物,研细,取约4 g,精密称定,加甲醇50 mL,超声处理(功率250 W,频率33 kHz)1 h,放冷。称定重量,用甲醇补足减失的重量。精密吸取25 mL续滤液,蒸干,残渣加水20 mL分次充分溶解,转移至分液漏斗中,用水饱和的正丁醇提取3次,每次20 mL。合并正丁醇液,用正丁醇饱和的氨试液洗涤3次,每次10 mL。分取正丁醇液,置水浴上蒸干,残渣用50%甲醇分次溶解,转移到10 mL量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,滤过,即得。
　　2.6  阴性样品溶液的制备
　　取阴性样品,照“2.5”项下方法制备,即得。
　　2.7  线性关系考察
　　精密称取5-O-甲基维斯阿米醇苷11.52 mg,置50 mL容量瓶中,加甲醇至刻度(0.230 4 mg/mL),摇匀,作为对照品储备液。精密吸取对照品储备液1.00、3.00、5.00、7.00、10.00 mL于50 mL容量瓶中,以50%甲醇稀释至刻度,摇匀过滤,分别精密吸取20 μL,注入液相色谱仪,测定。以峰面积对浓度(μg/mL)进行线性回归分析,得回归方程：A＝4.487 8×104C＋4.566 5×103,r＝0.999 9,表明5-O-甲基维斯阿米醇苷在0.092 2～0.922 μg范围内线性关系良好。
　　2.8  试验
　　精密吸取“2.7”项下对照品溶液20 μL,连续进样6次,测定,RSD＝0.15%(n＝6),表明精密度较好。取同一供试品溶液(批号20060617),分别在放置0、2、4、6、8、12 h后,依法测定1次,结果显示,12 h内供试品溶液中5-O-甲基维斯阿米醇苷峰面积稳定,RSD＝0.17%,表明稳定性较好。取同一批样品(批号20060617)6袋,研细,精密称定6份,按供试品溶液制备方法制备6份供试品溶液,依法测定,5-O-甲基维斯阿米醇苷平均含量为1.025 mg/袋,RSD＝0.42%(n＝6),表明重复性较好。精密称取已知含量的样品(批号20060617,含量为1.025 mg/袋,0.084 mg/g)6份,分别精密加入一定量的5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品,依法测定,计算回收率,结果见表1。取不同批次的样品,按照供试品溶液制备项下方法操作,得供试品溶液,按上述色谱条件分析测定,结果见表2。根据6批测定结果,我们将含量限度确定为本品每袋含防风以5-O-甲基维斯阿米醇苷(C22H28O10)计算不得少于0.60 mg