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　　1  仪器与试药
　　LC-20AT高效液相色谱仪(SPD-20A检测器,LCsolution/ Lite工作站)；远红外干燥箱；十万分之一电子天平(AUW220D,岛津),超声清洗机。没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号110770- 2005110)；甲醇(色谱醇,天津科密欧公司)；水(重蒸水)；其余试剂均为分析纯。五倍子药材于2007年10月采自贵州省都匀、清镇、赤水、关岭、镇远、花江、坪坝、沿河、遵义、道真。经贵阳中医学院生药教研室周汉华副教授鉴定为五倍子。样品粉碎后过40目筛,保存。
　　2  方法与结果
　　2.1  溶液的制备
　　2.1.1  对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品5.68 mg,用甲醇定容至100 mL,溶解,即得浓度0.056 8 mg/mL的没食子酸对照品溶液。
　　2.1.2  供试品溶液的制备
　　取本品粉末(过4号筛)约0.5 g,精密称定,精密加入4 mol/mL盐酸溶液50 mL,水浴中加热水解3.5 h,放冷,滤过。精密量取续滤液1 mL于100 mL容量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即得。
　　2.2  色谱条件
　　色谱柱为Alltima C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；以甲醇-水-磷酸(15∶85∶0.085)为流动相；流速1.0 mL/min；检测波长为270 nm；柱温为30 ℃；理论塔板数按没食子酸峰计算应不低于3 000；进样量为10 μL。色谱图见图1。
　　2.3  线性关系考察
　　取对照品溶液(0.056 8 mg/mL),分别进样2、4、6、8、10、12 μm,以峰面积为纵坐标,进样量(μg)为横坐标,绘制标准曲线。回归方程为：Y＝306 4731X－1 736.434,r＝0.999 9。表明在0.113 6～0.681 6 μg浓度范围内线性关系良好。
　　2.4  试验
　　精密吸取对照品溶液10 μL,按上述色谱条件测定,连续进样6次,没食子酸蜂面积的RSD＝0.25%。精密称取五倍子样品粉末6份,每份约0.5 g,按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,在上述色谱条件进行测定。分别求出其含量,计算,平均含量为55.13%,RSD＝2.6%。用考察精密度所用的没食子酸对照品溶液,分别于0、4、8、12、16 h进行测定,计算其RSD＝2.5%,结果表明没食子酸至少在16 h内稳定。精密称取已知含量的五倍子样品粉末(清镇)5份,每份约0.25 g,加入没食子酸适量,按供试品溶液的制备方法进行制备,按上述色谱条件进行测定,结果平均回收率为99.86%,RSD＝1.89%。结果见表1。
　　3  结果
　　在流动相的选择过程中,我们曾参考文献[2-3]方法,结果表明,以甲醇-0.1%磷酸水溶液系统为流动相测定没食子酸,可使没食子酸的分离度、理论塔板数、峰的对称性及出峰时间达到满意的结果。并通过紫外扫描,最终确定最佳检测波长为270 nm。分别对提取溶剂的酸度和提取时间以及水浴温度进行了考察,结果表明,盐酸浓度4 mol/L、95 ℃水浴3.5 h时测得没食子酸含量最高,说明已水解完全[3]。共测定10批五倍子药材,没食子酸的含量在51.43%～60.25%,均达到《中华人民共和国药典》规定的标准[4]。