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　　HPLC法对不同产地的柴葛、粉葛中的葛根素的含量进行了测定，表明柴葛中葛根素含量约为粉葛的3倍，紫外测总黄酮含量表明，柴葛中葛根素量占总黄酮量的55%左右，粉葛中葛根素量占其总黄酮量的48%左右。同时比较了不同提取方法对葛根素和总黄酮含量测定的影响，发现回流提取法得到的葛根素含量较高，更有利于其提取。
　　葛根素HPLC图谱中葛根素峰易拖尾，分离度低，本文研究了甲醇：水不同配比对峰形、分离度和保留时间的影响，体积比为25∶75时葛根素峰拖尾，与后面的小峰分离度为1.3,体积比为35∶65时葛根素峰与前峰易重合。甲醇∶水比（V/V）为32∶68时，在样品分析中葛根素与其它峰均能达到基线分离，保留时间适中，柱效高，故选用为流动相。
　　1 仪器与材料
　　1.1 仪器美国 Waters 公司600-2487高效液相色谱仪，Millenium数据处理系统；Waters2487紫外检测器；岛津UV-2401PC型紫外分光光度计；岛津AY120型万分之一电子分析天平；SB3200型超声清洗器。
　　1.2 材料葛根素对照品：中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯；水为重蒸馏超纯水；其它试剂均为分析纯。柴葛产于安徽岳西，粉葛产于广西。
　　2 方法与结果
　　2.1 HPLC法测定葛根中葛根素的含量
　　2.1.1 色谱条件色谱柱：Zorbax XDB-C18（4.6mm×250mm, 5μm）；流动相∶甲醇-水（32∶68）；流速1ml/min;检测波长250 nm;柱温22℃；进样体积10μl。理论板数按葛根素峰计算不低于5000。在该色谱条件下，样品中的葛根素与其它峰均能达到基线分离，保留时间在14.3 min左右。
　　2.1.2 对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品5.1mg,甲醇定容于25ml量瓶。分别移取0.5,1.0,2.0,2.5ml于5ml量瓶，水定容，与原液共同作为HPLC用对照品溶液。
　　2.1.3 供试品溶液的制备 热回流提取法：精密称取柴葛、粉葛粉末（过50目筛）各0.1g,置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇50 ml,称重。回流提取30min,放冷，称重并以30%乙醇补足减失重量，摇匀过滤，取续滤液为供试品，待测。
　　2.1.4 线性关系考察取对照品溶液，按照色谱条件进样10μl,葛根素进样量X（μg）为横坐标，以峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，其回归方程为：Y=3.5076×106X+3.2745×104,r=0.9999。结果表明，葛根素进样量在0.204~2.04μg范围内与峰面积线性关系良好，可用外标两点法计算含量。
　　2.1.5 精密度考察在色谱条件下，吸取同一对照品溶液10 μl,连续进样5次，测得峰面积，RSD=0.8%,表明进样与峰面积积分的精密度良好。
　　2.1.6 重复性考察取同一批柴葛、粉葛样品5份，按外标法计算含量，RSD=2.8%,表明分析方法重复性良好。
　　2.1.7 稳定性考察精密吸取对照
　　品溶液10μl,分别在0,1,2,4,8,12,24,48h时进样，在色谱条件下测定峰面积，其RSD值为1.4%。表明葛根素在室内正常条件下48h内稳定，因此整个实验过程可以在常温不避光的条件下操作。
　　2.1.8 回收率考察精密称取已知葛根素含量的同一样品药材粉末5份，20mg/份，精密称定后，每份加入浓度为0.204mg/ml的对照品溶液2.5~3.3 ml,按“供试品溶液制备”项下操作，精密吸取10 μl,进样，计算回收率。
　　2.1.9 样品测定按“供试品溶液制备”项下操作，制备各样品溶液，精密吸取10μl,进样，在所选色谱条件下测定，外标两点法计算含量。
　　2.2 紫外分光光度法测定葛根中总黄酮含量
　　2.2.1 线性关系考察精密称取葛根素对照品5.1mg,甲醇定容于25ml量瓶。移取0.2,0.4,0.5,0.6,0.8ml置于10ml量瓶，水定容，为紫外测总黄酮用对照品溶液。以溶液浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，得线性方程：Y= 0.078X+0.0152,r=0.9998。表明总黄酮浓度在4.08~16.32μg/ml范围时与吸收度线性关系良好。
　　2.2.2 供试品制备 方法1:分别称取柴葛、粉葛4.5g,置于圆底烧瓶，乙醇回流提取3次，40ml/次，时间均为1h。合并3次滤液并浓缩置25ml量瓶，乙醇定容。取1ml用乙醇定容于100量瓶，再取1ml上清液于10ml量瓶，水定容，待测。以1ml乙醇加水定容于10ml量瓶中为空白对照。
　　方法2:取上述液相用索氏提取法制得的待测品0.4ml,置于10ml量瓶，水定容，待测。吸收波长考察与样品测定在200~800nm间紫外扫描浓度为8.16μg/ml的葛根素对照品溶液。在249~251nm处有最大吸收，选用250nm测定。分别测定两种方法制得4个样品。