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　　地理环境和气候条件是有效成分积累的基础[2],所以,来源于不同地区的白头翁药材,白头翁皂苷B4含量有一定的差异。中药材和饮片是中药质量源头,其真伪优劣直接影响到中成药的质量,也关系到中医临床疗效和患者的用药安全[3]。有效成分的含量与产地、采收时间及加工方法密切相关。
　　1  材料
　　美国Waters 1525型高效液相色谱仪,2487 DAD紫外检测器,Breeze色谱工作站(美国Waters)；TU-1810SPC紫外可见分光光度计(北京普析通用有限公司)；BS21S精密电子天平(德国赛多利斯天平有限公司)。白头翁皂苷B4,暨南大学叶文才教授惠赠。乙腈、甲醇为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。
　　2  方法与结果
　　2.1  白头翁样品的采集
　　市场样品采集于2006年9月,在亳州中药材大市场不同的摊位购白头翁药材A、B、C 3种及饮片D、E 2种。A产地长春；B产地河南；C产地安徽；D购自亳州京皖饮片厂,产地内蒙古；E购于亳州中信饮片厂,产地安徽。滁州凤阳九华山白头翁于2006年8月采集,清水洗净,拭干,立即置105 ℃干燥箱杀酶5 min,取出,待温度降至50 ℃,再放入干燥箱中烘干,编号为F。
　　2.2  白头翁皂苷B4含量测定
　　2.2.1  检测波长的确定
　　取白头翁对照品溶液,以甲醇溶液作空白基线,在400～190 nm波长范围内扫描。结果表明,白头翁皂苷B4在205 nm波长处有最大吸收,甲醇溶液对样品的测定无干扰。
　　2.2.2  色谱条件
　　固定相：ZORBAX SB-C18柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm)；流动相：乙腈-水(28∶72)；体积流量1.0 mL/min；检测波长205 nm；柱温：室温。
　　2.2.3  标准曲线的制作
　　称取5.0 mg白头翁皂苷B4置10 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇均,即得0.5 mg/mL浓度的白头翁皂苷B4溶液,取5 mL置10 mL容量瓶中,甲醇定容至刻度得0.25 mg/mL,依次类推,进行倍比稀释得0.125、0.625、0.031 2、0.015 6 mg/mL 6个梯度浓度的对照品溶液,进样量20 μL。以进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程Y＝276 350X－12 180,R2＝0.999 6。白头翁皂苷B4在0.312 5～10 μg范围线性关系良好。
　　2.2.4  系统适用性考察
　　在上述色谱条件下,分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μL,注入液相色谱仪,测定。结果表明,供试品中白头翁皂苷B4与其相邻峰的分离好,保留时间适中(近8 min)。结果见图1。
　　2.2.5  精密度试验
　　精密吸取对照品溶液20 μL,注入液相色谱仪中,平行测定5次,在上述色谱条件下测定,对照品峰面积的RSD＝0.72%。结果表明精密度良好。精密吸取同一供试品溶液20 μL,注入色谱仪中,在上述色谱条件下,于0、2、4、6、8、12、24 h范围内测定,结果表明,供试品溶液在24 h内稳定性良好,供试品白头翁皂苷B4峰面积RSD＝1.20%。
　　2.2.6  重复性试验
　　取滁州凤阳白头翁100 g,粉碎、混匀。分为5份(各20 g),照供试品溶液制备项下操作,制成供试品溶液,在上述色谱条件下测其白头翁皂苷B4的峰面积,RSD＝0.80%,表明重复性良好。精密称取已知皂苷B4含量的样品0.50 g,分别加入皂苷B4对照品适量,依供试品溶液的制备方法处理成5份,按上述色谱条件进样分析。回收率(n＝5)为99.5%,RSD＝1.10%。