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1 仪器与试药
Angilent HP1100高效液相色谱仪;G1314A紫外检测器;KQ-500DE型超声仪。益母草药材购于广州广弘药材有限公司,经南方医科大学中医药学院药用植物与鉴定教研室陈兴兴鉴定为益母草 Leonurus japonicus Houtt.的干燥地上部分。盐酸水苏碱对照品(批号0722-200108,中国药品生物制品检定所)。水为高纯水;磷酸二氢钠、磷酸(色谱级,北京仁凡红建商贸有限公司);其余试剂均为分析纯。
2 方法及结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Spherisorb SCX(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:20 mmol/L磷酸二氢钠溶液(含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸);柱温:25 ℃;流速:1.0 mL/min;检测波长:192 nm;进样量:10 μL。理论板数按盐酸水苏碱峰计算应不低于5 000。
2.2 线性关系考察
分别精密吸取对照品储备液0.2、0.6、1.0、1.4、1.8 mL至10 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,备用。各精密吸取10 μL注入液相色谱仪中,测定,测得峰面积。以对照品进样量为横坐标、吸光度为纵坐标做标准曲线,线性范围为0.2~1.8 μg,回归方程Y=237.49X-4.406 9,r=0.999 9。
2.3 精密度试验
精密吸取水苏碱对照品溶液(0.101 5 mg/mL)10 μL连续进样5次,测得5次峰面积分别为234.270 32、234.843 43、235.147 35、233.115 34、235.979 72,平均值为234.671 232, RSD=0.45%,表明仪器精密度良好。
2.4 稳定性试验
取供试品溶液,每隔2 h测定1次,共测定5次,测得峰面积分别为279.403 14、282.599 58、275.727 75、279.743 87、280.633 12,平均值为279.621 49,RSD=0.90%,表明供试样品在8 h内稳定。取药材粉末5份,各1 g,精密称定,按正文中供试品溶液的制备方法制备样品,测定,含量分别为(%):0.555 5、0.557 8、0.548 9、0.548 8、0.571 4,平均值为0.556 5%,RSD=1.66%。结果表明,该方法稳定、可行。分别取药材粉末6份(含量为0.556 5%),精密称定,分别精密加入盐酸水苏碱对照品溶液(2.60 mg/mL)1 mL,水浴上挥干溶剂,再精密加乙醇50 mL,按正文中供试品溶液的制备方法制备样品,测定,测得回收率见表1。分别取益母草的花、茎、叶,按供试品溶液的制备方法制备供试品,分别进样,测定,即得。结果见表2。