关于大黄透皮吸收的研究-关于宫外孕的论文

关于宫外孕的论文    医学核心期刊     医学护理论文    医学论文发表
1 仪器与试剂
　　高效液相色谱仪（美国安捷伦1100，包括真空在线脱气机，四元泵，自动进样器，紫外检测器等），旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），分析天平（上海恒平科学仪器有限公司），DF-101S恒温水浴磁力搅拌器（河南省予华仪器有限公司），Franz扩散池（沈阳玻璃仪器加工厂）。
　　西域大黄（安国市京兴药业责任有限公司），大黄酚，大黄素，大黄素甲醚，大黄酸，芦荟大黄对照品（中国生物药物制品研究所），丙三醇（锦西化学试剂厂），油酸（国安恒业精细化工有限公司），氮酮（北京市德鸿盛生物化学科技有限公司），无水乙醇等均为分析纯试剂。
　　2 方法与结果
　　2.1 大黄中蒽醌类物质的提取与制备
　　大黄粉碎后，过筛，取50 g大黄粉末，用300 ml 95%乙醇，水浴恒温回流4次，0.5 h/次，回流时温度控制在79℃左右，合并回流液。用旋转蒸发仪对合并液进行浓缩至70 ml左右，回收乙醇，浓缩液再进行乙醚（100 ml）萃取3次，合并，温度控制在35℃左右，用旋转蒸发仪蒸去乙醚（回收）。液体变粘稠后，继续加热至50℃蒸干，得黄棕色固体，即蒽醌粗品。对粗品用碱溶酸沉法进行纯化，再离心，得黄棕色沉淀，阴凉、干燥处风干，得黄棕色晶体粉末（大黄总蒽醌），备用。
　　2.2 分析方法的建立与考察
　　2.2.3 精密度实验
　　精密吸取大黄蒽醌混合液20 μl，在“2.2.1”项的色谱条件下，连续进样5次。RSD%分别为大黄酸0.13，大黄素0.11，大黄酚0.11，大黄素甲醚0.08。
　　2.2.4 稳定性实验
　　精密吸取大黄蒽醌对照混合液20 μl，分别在0，1，2，6，12 h进样，按色谱条件测定，测定结果大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的RSD分别为0.50%， 0.69%， 0.60%，0.57%。说明大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚非常稳定。取约12 mg大黄蒽醌5份，用甲醇适当稀释后，用0.45 μm的滤膜过滤，进样20 μl，测定大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的峰面积，结果RSD%分别为0.62，0.55，0.64，0.45。精密吸取大黄蒽醌10 μl与对照品混合液4，6，8，10，12，16 μl混合，并用甲醇补充至20 μl后进样测定，计算得大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚平均回收率分别为100.6，100.7，100.2，100.0。
　　2.3 体外透皮吸收实验
　　2.3.1   离体鼠皮的制备取质量为50～100 g 的小鼠，断颈处死，剃去腹部的毛，剪下皮肤，去除皮下组织，用生理盐水反复多次冲洗，置于-40℃的冰箱中保存。
　　2.3.2   大黄蒽醌的体外透皮吸收实验
　　体外渗透扩散装置恒温槽中加入适量水，设定恒温槽中水温为（37±0.1）℃。向垂直扩散池的接收池内加入16.5ml接收液（30%的乙醇，pH=6.0），进行预热，设定接收池搅拌速度为400 r/s。将鼠皮用铁夹子固定在两室之间，向供给池内加入已配好的供试液10 ml（取大黄总蒽醌480 mg，用甲醇定容至100 ml）。分别于0.5，1，2，4，6 h从接收池取样1 ml，同时向接收池中补充等量的接收液。用0.45 μm滤膜过滤，进样20 μl测定。按下式计算累积透过量（μg·cm-1）。
　　Q=Cn×5+n-1i=1Ci×4A
　　其中，Cn为第n个取样点的药物浓度（μg/ml），Ci为第i个取样点的药物浓度，A为扩散面积。以累积透过量Q对时间T进行作图，取曲线前端的直线部分进行线性回归，所得方程的斜率即为透皮速率。结果大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的透皮速率分别为：0.142，0.109，0.047 4，0.040 6。6 h时累积透过量（μg/cm2）分别为： 0.918，0.704，0.410，0.304。关于大黄透皮吸收的研究中，现有的报道均对大黄中的大黄酚进行检测，而忽略了大黄中的其他有效成分。所以，本实验检测指标较多，同时对其大黄酸、大黄酚及大黄素甲醚等进行了透皮吸收的考察，以求得全面科学地探究透皮吸收及其促透作用情况。