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　　1  材料与方法
　　1.1  材料
　　1.1.1  实验对象  高分化子宫内膜腺癌细胞（Ishikawa细胞系）：购自美国ATCC细胞库。
　　1.1.2  药物与试剂  大蒜素为安徽安达产品有限公司惠赠。顺铂为中国齐鲁制药厂产品。鼠抗人bcl-2单克隆抗体，北京中山生物公司产品。Telomerase-PCR-ELISA检测试剂盒为Boehringer Manheim公司。
　　1.1.3  主要仪器  芬兰Labsystems Dragon Well Scan MN3型酶标仪。流式细胞仪（Beckman Coulter Epics XLUSA）。5% CO2无菌恒温培养箱Heraeus BB5060/BB16（上海）。
　　1.2  方法
　　1.2.1  细胞培育
　　人子宫内膜癌Ishikawa细胞用RPMI-1 640培养液（含青霉素浓度为100 IU/ml,链霉素浓度为100 μg/ml,10%胎牛血清，pH值7.2），于37 ℃、5% CO2饱和湿度培养箱内松盖培育。
　　1.2.2  MTT检测
　　取对数生长的Ishikawa细胞，制成浓度为7×104个/ml的细胞悬液，接种到96孔培养板中，每孔100 μl，贴壁后，换培养液，实验组分为大蒜素组、顺铂组和大蒜素+顺铂组，大蒜素组（由吐温80溶解）分别加入含大蒜素为12.5、25、50 mg/L的培养液（各组含0.01%吐温80）；顺铂组加入含顺铂为1.0 mg/L的培养液；大蒜素+顺铂组加入含各浓度大蒜素和顺铂（1.0 mg/L）的培养液，对照组为含0.01%吐温80的培养液。每一浓度均设6个平行孔。每个实验均重复3次。继续培养24、48、72 h后，每孔加入20 μl浓度为5 mg/ml的MTT溶液，继续孵育4 h。吸净上清液，每孔加入二甲基亚砜200 μl，振荡8～10 min,用酶标光度仪在波长为492 nm时测定每孔的吸光度（A）值，并计算抑制率，抑制率=（对照组A值-实验组A值/对照组A值）×100%。
　　1.2.3  细胞周期和细胞凋亡的检测
　　将浓度为7×104个/ml接种于100 ml培养瓶中。贴壁后加入上述大蒜素组和大蒜素+顺铂组培养液。对照组加入含0.01%吐温80的培养液。继续培养72 h，用胰酶消化后收集细胞，用70%的冷乙醇固定，用PI（50 μg/ml）1 ml避光染色后，置流式细胞仪（flow cytometer,FCM）分析。
　　1.2.4  Ishikawa细胞端粒酶活性测定
　　（1）取1×105个Ishikawa细胞行裂解、端粒酶的提取，移取上清液。（2）端粒重复序列扩增反应（TRAP）：参照说明书。取20 μg细胞提取物，反应总体积为50 μl。PCR仪行产物扩增；引物延长，一个循环；端粒酶灭活，一个循环；端粒酶扩增30个循环；72 ℃平衡10 min,4 ℃保存。（3）杂交及酶联免疫吸附反应（ELISA），30 min内于酶标仪上测定在波长450 nm/690 nm处的吸光度A值，根据ΔA=A450-A690计算。
　　1.2.5  Ishikawa细胞株bcl-2测定
　　取浓度为7×104个/ml的Ishikawa细胞，以链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接（Streptavidin/Peroxidase,SP）法测定Ishikawa细胞bcl-2抗体。在6孔板中预先放置盖玻片，将细胞悬液滴在盖玻片上，爬片后加入各浓度实验组培养液。对照组加入含0.01%吐温80的培养液。结果判定采用组织化学评分（H-score）法：每一浓度2张玻片，每片至少观察5个视野，阳性染色为细胞核内出现棕黄色颗粒，以代表染色深浅，共0～3分：0分为不着色；1分为着色浅，呈浅黄色；2分为中度着色，呈深黄色；3分为着色深，呈棕色/咖啡色。Pi代表每一着色程度的细胞所占的比例，为0～100%，H-score=∑Pi（i±1），满分为4分。
　　2  结果
　　本实验结果显示，当顺铂浓度为1.0 mg/L时，对Ishikawa细胞生长有轻度抑制作用，但与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。即顺铂在该浓度时对细胞生长无影响，见表1。而大蒜素和大蒜素+顺铂组均对细胞有明显的抑制作用（P＜0.01），且在两组内随着时间和浓度的增加，增殖抑制率升高，增殖抑制率与时间和浓度之间具有显着正相关性（P＜0.01）。各浓度的大蒜素单独作用后的细胞抑制率低于与之相对应的大蒜素和顺铂联合作用下的增殖抑制率，两者相比，差异有统计学意义（P＜0.01），见表2。
　　经不同浓度的大蒜素处理24、48、72 h后，细胞中端粒酶的活性呈现出随时间和浓度增加而降低的趋势，而大蒜素联合顺铂组细胞中端粒酶活性的降低较单纯使用大蒜素更明显，且与对照组比较，其差异有显着统计学意义（P＜0.01），见表3。
　　Ishikawa细胞核出现棕黄色颗粒为阳性染色，经不同浓度的大蒜素处理24、48、72 h后，细胞中bcl-2的含量呈现出随时间和浓度增加而降低的趋势，而大蒜素联合顺铂组细胞中bcl-2的含量降低较单纯使用大蒜素更明显，两者相比差异有显着性意义（P＜0.01），且各组内差异亦有显着性意义（P＜0.01）。