探究黄芩苷对黑质部位注射铁剂所造成损毁的保护作用-口腔医学导

口腔医学导论的论文口腔医学论文口腔护理论文发表护理学论文发表
　　1 材料与方法
　　1.1 实验动物分组、给药及处理健康雄性Wistar大鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号：SCXK（京）20070001］26只，体质量250～300 g，随机分为3组，模型组13只，黄芩苷组11只，该组手术前灌胃黄芩苷（78mg·kg-1·d-1［7］，四川广汉市本草植化有限公司产品，批号：030812）1周。2只为假手术对照。模型组和黄芩苷组均施予FeCl3脑内定位注射，假手术组除注射外均与其他组相同处理。各组手术后饲养5周，期间记录大鼠行为学变化并拍摄摄像，实验结束时各组取2只做病理的动物麻醉后开胸，行多聚甲醛心脏灌注固定，24 h内制作中脑黑质部位冰冻切片（片厚50μm），以备做免疫组化分析和铁染色。其余动物断头处死，迅速冰盘上分离纹状体、中脑黑质、海马、大脑皮层及其余脑组织置-80℃保存。
　　1.2 黑质内定向注射FeCl3［2］大鼠用10%水合氯醛麻醉（0.35 ml/100 g）后固定于立体定位仪上，按照下列坐标将无菌FeCl3 溶液（20 mg/ml），分为两点（每点1μl）缓慢注射至左侧黑质中：作标为①门齿棒上2.4 mm，前囟下4.4 mm，中线旁开1.1 mm，颅骨下7.9mm；②门齿棒下3.4 mm，前囟下4.0 mm，中线旁开0.8 mm，颅骨下8.1 mm。大鼠铁剂总量为40 μg。
　　1.3 黑质酪氨酸羟化酶（TH）免疫组化染色各组做病理的大鼠脑切片在0.01 mol/L PBS液中浸洗2 min×3次；室温入1N盐酸抗原修复30 min，蒸馏水浸洗3 min×3次；再入3%H2O2消除内源性过氧化物酶的活性10 min，蒸馏水浸洗3次， 0.01mol/L PBST浸洗0.5min×2 次；入5%正常羊血清封闭30 min，倾去血清后直入适当稀释的Ⅰ抗（大鼠单克隆TH抗体 ,sigma）室温过夜；0.01 mol/L PBS液中浸洗2 min×3次；入1：300生物素标记的Ⅱ抗（羊抗小鼠IgG，北京中山金桥生物技术有限公司）室温23h，0.01 M PBS液中浸洗2 min×3次。入1:300辣根酶标记的链霉卵白素（Ⅲ抗）2～3h，再入0.01 mol/L PBS液中浸洗2 min×3次，每次；DAB显色10～30min。然后入水充分浸洗。裱片，自然干燥。
　　1.4 铁染色［7］脑切片置于含4%多聚甲醛的PB液中5 min，蒸馏水冲洗30s，新鲜配置的2% HCl与2%亚铁氰化钾等体积混合液30 min，PBS冲洗5 min×2次， 1% H2O2甲醇溶液20 min，PBS冲洗5 min×2次，DAB显色，二甲苯透明，中性树胶封片，镜检。
　　2 结果
　　铁染色结果模型组注射侧中脑见到明显的铁沉积，针孔周围脑组织损毁严重（见图4与图6比较） ,黑质部位注射侧铁染色阳性细胞数明显高于对侧（见表1），甚至有些部位可见注射侧中脑结构塌陷（见图1），应是铁的毒性所造成的脑组织破坏所致。而黄芩苷组未见到中脑铁的沉积，也未见到组织损毁（见图5），黑质部位注射侧铁染色阳性细胞数明显高于对侧（见表1）。提示黄芩苷能够通过某种途径对抗、阻止注射的铁在中脑的沉积及所造成的损伤。 TH染色结果有些切片见注射侧黑质多巴胺能神经细胞明显出现缺失（见图1），对侧较注射侧明显减轻（图2与图3比较），但各组多张切片的图象分析结果显示注射侧TH染色阳性细胞与未注射侧没有明显差别。