血小板聚集测定是Born和OBrien在1962年独立发展起来的，已被公认为评价血小板功能的金标准，目前可用于监控抗血小板疗效和血小板功能亢进。但由于实验方法学、检测仪器与试剂、质量控制措施、操作人员素质多方面的影响，临床工作中获得准确有意义的血小板功能试验结果是较困难的，血标本的质量、处理温度和标本的老化在血小板分析过程中也可产生假性结果，而致实验结果在不同实验室不具可比性。本实验探讨了血标本室温放置时间对血小板聚集的影响，以期确定一个不影响血小板聚集的血标本室温放置时间范围，为血小板功能分析质量控制提供试验依据。
1 材料与方法
1．1 标本来源 随机收集2009年4月~2010年8月在解放军总医院门诊体格检查志愿者126名，男73名，女53名，年龄46～60岁，平均年龄51岁。二磷酸腺苷(ADP)诱导血小板聚集试验36例及pH测试3O例，花生四烯酸(AA)诱导血小板聚集试验6O例。
1．2 仪器与试剂 CHRON0一LOG MODEL700血小板聚集仪及配套试剂购自美国CHRONOLOG公司；Thermo IEC CL40离心机购自美国Thermo公司；SYSMEX XE-2100血细胞分析仪购自希森美康公司；ABL700血气分析仪及试剂购tl丹麦ABL公司；枸橼酸钠购自BD公司；1ml，10l移液器。
1．3 实验方法
1．3．1 采用血浆比浊法：空腹采集志愿者(凝血指标正常)静脉血8 ml／人，枸橼酸钠抗凝，抽血开始计时，将枸橼酸钠抗凝血轻轻混匀后，800 r／min(离心半径19 cm)离心5 min，分离富含血小板血浆(PRP)，剩余标本4 000 r／min(离心半径19 cm)离心8 min，分离贫血小板血浆(PPP)。XE一21oo血液分析仪计数PRP血小板浓度，并将血小板浓度调至250×10。／L左右，将PRP混匀，取6只血小板聚集杯，每杯注入PRP 300 1，将PRP置于室温25℃ ，分别于1．5，4，6，8，10，24 h测血小板聚集率，加入诱导剂ADP(终浓度10 tlmol／L)或AA(终浓度0．5 mmol／L或1．0 mmol／L)反应1Omin，记录血小板聚集率，收集各组单次测定数据。
1．3．2 血浆pH值测定：将上述放置1．5，4，6，8，1O，24 h的血浆，分别用ABL700血气分析仪测PH值，收集各组单次测定数据。
1．4 统计学分析应用SPSS 13．0统计软件进行数据处理和分析。检测数据以均数±标准差( 土s)表示，多组测试数据之间的比较应用单因素方差分析，两两比较应用we1ch法或Dunnett’S T3检验，P<0．05为差异有统计学意义。
2 实验结果 见表1。室温放置1．5～24 h，对pH，ADP和AA诱导聚集有明显的影响。pH值随放置时间延长而增大；ADP诱导聚集率随标本放置时间的延长而逐渐降低，1．5h组与4 h组值之间差异无统计学意义(P>0．05)，1．5 h组与6，8，10，24 h组值之间差异均有统计学意义(P<0．o5)；AA诱导随标本放置时间延长而不聚，血小板对AA敏感性降低，常规AA 0．5 mmol／L浓度下，1．5 h组与4 h组值之间差异无统计学意义(P>0．05)，1．5 h组与6，8，10，24 h组值之间差异均有统计学意义(P<O．05)，PRP放置4 h有1例不聚；6 h有7例不聚，2例延迟聚集；8 h有18例不聚。在AA 1．0 mmol／L浓度下，8 h后血小板聚集率降低明显，标本放置1．5 h组与4，6，8 h组值之间差异无统计学意义(P>O．05)。
3 讨论血小板具有止血功能，在小血管破裂处，血小板聚集成血小板栓，堵住破裂口，并释放肾上腺素、5一羟色胺等具有收缩血管作用的物质，是促进血液凝固的重要因素之一。血小板还有支持和营养毛细血管内皮细胞的作用，使毛细血管脆性减少。如果血小板质、量异常，特别是血小板功能异常，会导致出血倾向。故血小板功能检查如血小板聚集实验有助于出血疾病的鉴别诊断。
临床血标本经病区护士采集(大医院一般在凌晨5～6点)，再送人实验室(一般在上午8点以后)，再经实验人员2次离心分离PRP和PPP，计数PRP血小板浓度、配制实验所需浓度上机得出结果，至少在采血3 h之后或更长时间。在这期间，标本血细胞包括血小板在体外也进行新陈代谢，随时间延长渗透压、pH值等变化，标本发生老化。故本实验观察室温放置时间对血小板聚集率的影响，标本采集后立即入实验室，经离心、计数、配制等实验前准备，1．5～24 h上机检测结果。实验发现，随血标本放置时间延长，pH 由于血标本中CO。不断逸出而值增大；血小板对诱导剂敏感性降低，血小板聚集率降低，而可能致临床医生误判患者血小板功能或抗血小板药物疗效。ADP诱导血小板聚集率随时问延长而逐渐降低，4 h后聚集率明显下降；AA诱导血小板聚集,呈“全或无”式(即聚集则呈全量式聚集，否则就不聚)，随放置时间延长，越来越多标本血小板不聚集，0．5 mmol／L AA诱导血小板聚集从4 h后一些标本不聚集而聚集率明显降低，1．0mmol／L AA诱导血小板聚集8 h后聚集率明显降低。据文献报道，0．5 mmol／L AA诱导血小板聚集率比1．0 mmol／L AA诱导血小板聚集率稍低，但它们之间差异无统计学意义。故在临床血小板聚集实验检测中，如标本时间放置稍长(8 h内)，可用较高浓度AA(1．0～2．0 mmol／L)诱导聚集，也可得到较可靠的检测结果(只限AA诱导血小板聚集)。
综上所述，血小板功能实验应在规定时间内完成，以加强对其分析前质量控制，ADP诱导血小板聚集随标本放置时间延长而逐渐降低，AA诱导聚集率随标本放置时间延长而降低或不聚，终浓度10／lmol／L ADP，0．5 mmol／LAA诱导聚集应在采血后4 h内完成；标本放置时间长，AA和ADP血小板聚集率降低可能与标本老化、pH过高有关。
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