随着医疗技术的发展和进步，内镜检查的应用日趋广泛。严格的内镜清洗消毒已经成为保障患者健康和减少医源性感染的重要措施之一。在内镜清洗消毒过程中，如果省略了清洗程序的某个环节或随意缩短消毒剂作用时间，内镜就达不到消毒或灭菌要求，是医院感染的危险因素之一。但目前国内对内镜等医疗器械清洗效果的评价尚没有统一标准。为科学评价内镜清洗质量，研究出快速简便、有效的检测清洗效果的方法是一个非常紧迫的课题。近年来国外有学者将ATP(三磷酸腺苷)生物荧光法引入到医疗器械清洗前、后残留物检测。本研究拟通过对ATP生物荧光法与细菌培养法的相关性研究，并对经过初步清洗的临床术后内镜的ATP量与细菌培养计数进行对比分析，以评价内镜清洗效果。
l 材料与方法
1．1 研究对象 随机抽取2012年5月～8月，皖南医学院附属弋矶山医院内镜中心临床术后内镜及附件13台。
1．2 试剂和仪器 Bio Tek FLx800荧光分析仪(美国伯乐公司)；杰力试纸，裂解液，荧光素酶(瑞典Bio Thema公司)。
1．3 方法 ATP生物荧光法测定原理是利用荧光素酶(1uciferase enzyme)在Mg抖，ATP和氧的参与下进行的酶促反应，放出光子，产生560 nm的荧光：ATP+I)Luciferin + O一Oxylu一ciferin+AMP+ppi+0：十Light经裂解液作用后，细菌裂解释放出ATP，再加入荧光素一荧光素酶在荧光素和荧光素酶的作用下，ATP释放磷酸基团同理发出荧光，用生物荧光仪检测相对荧光强度(relative light units，RLu)，由此测出ATP含量，进而反映细菌含量。
1．3．1 两种方法相关性试验：取37℃培养24 h的大肠埃希菌(ATCC 8739)，制成菌悬液备用。将菌悬液从原液～1．0×10 作系列梯度稀释，取混合均匀的各稀释度菌悬液0．5 ml接种于无菌平皿上，置37℃恒温培养箱48h，重复3次，计数菌数平均值。取各稀释度菌悬液5Ol加入到无菌离心管中，然后加入5Ol裂解液，混匀后室温下放置5min，再加入400 l荧光素酶，迅速混匀后立即用荧光仪测定其RLU。根据各稀释度菌悬液的菌数计数值与RIU值之间的关系进行曲线标定。空白值用灭菌的0．85 g／dl生理盐水进行测定，所有检测都重复3次取其平均值。
1．3．2 两种方法测定内镜清洗后细菌残留量：将随机抽取的术后内镜及附件按照《内镜清洗消毒技术操作规范(2004年版)》进行水洗，然后放入1：200稀释的低泡多酶制剂内浸泡3 min，再用清水清洗，晾干后放人含5．0 ml TPS试管中，充分洗脱后，对洗脱液进行细菌培养，37℃ 培养48 h后计数；然后取5O l洗脱液加入到无菌离心管中，再加入5O l裂解液，混匀后于室温放置5 min，再加入400／11荧光素酶，混匀后立即用荧光仪测定其RLU。同时取3件未清洗的术后内镜，按上述方法分别进行细菌培养计数和RLU 的测定，作为清洗前对照；取TPS分别进行细菌培养计数和RLU测定，作为阴性对照。试验重复3次。
1．4 统计学分析 所有统计学处理均由SPSS17．0软件完成。变量间的比较用直线相关分析和散点图进行统计分析。
2 结果
2．1 各稀释度大肠埃希菌检出数与RLU 关系检测结果表明，随着大肠埃希菌菌悬液稀释度的增加，RLU值逐渐降低(见表1)，检出菌数的对数值与RLU值的对数值之间具有明显的相关性，相关系数(r=0．987 3，P<0．001)，其线性方程为y：1．300 0X一0．303 2。
2．2 两种方法测定内镜清洗后细菌残留量将清洗后的10台内镜做隐血试验，有一台为阳性(见表2)，培养计数的对数值与RLU值的对数值之间并不具有明显的相关性，相关系数r=0．167 7，P>0．05，其线性方程为y=0．072 6X+2．073 7。、3 讨论医院感染是医院综合水平的体现，是保证医疗质量和患者健康的重要前提。医疗器械使用后进行彻底的清洗、消毒、灭菌是控制医院感染的关键环节。卫生部颁布的《消毒技术规范》、《医院感染管理规范》、《内镜清洗消毒技术规范》中均明确规定，医疗器械必须彻底清洗后再进行消毒灭菌，但目前对其清洗质量的评价并没有统一的标准。目前，多数医院主要采用肉眼裸视法、校正视力法、隐血试验法等方法评价清洗效果，但这些评价方法比较粗糙，如肉眼只能观察劲>50／m 的污染物质，散在与内镜缝隙中的微量血红蛋白是无法观察到的，而隐血试验也只能检测出5 mg／L以上的血液残留。ATP是普遍存在于动物、植物、细菌、酵母和真菌等细胞中的能量分子，细菌数多，产生代谢物高，ATP含量就越高，ATP生物荧光法所测RLU 值与ATP含量呈正比，能间接反映出微生物或有机物的含量，具有简便、灵敏、工作效率高等优点。
本研究在验证了细菌培养计数与荧光法的相关性后，又随机抽取临床术后初步清洗后的内镜细菌培养计数和生物荧光法的结果进行了对比分析。
结果显示大肠埃希菌菌悬液在原液1．0×10-7稀释度范围内，菌数对数值与RLU值对数值之间具有明显的相关性，r=0．987 3，P<0．01，菌悬液含菌量越高，RLU 值越大，说明可以通过测定RLU值来确定细菌数量，此结果与相关报道相符。
而经过初步清洗的术后内镜的菌数对数值与RLU值对数值之间并不具有明显的相关性，r=0．1677，P>0．05，而且隐血阳性的标本，其RLU 值更高，说明经过清洗后内镜上除细菌之外仍残留有血液、脂肪等有机物，此与国外有关学者发现ATP生物荧光法检测清洗效果不通过的医疗器械要多于微．生物法的报道相符E 。也有报道ATP生物荧光法检测目测法合格的医疗器械清洗质量合格率最高仅为74．42%，且有齿类器械合格率较低，管腔类器械合格率最低。这也说明ATP法对内镜清洗质量的监测更加严格、准确、高效，能最大程度地减少有机物残留，同时也可用于器械污染程度的定量研究。虽然ATP生物荧光技术已成熟应用于食品和公共卫生等行业，但内镜清洗过程中使用的清洗液和多酶制剂等的残留对ATP生物荧光法测定是否有干扰，以及不同医疗器械清洗合格标准的RLU值的确定和方法的准确性、重复性等，还需要进一步的研究以及大量的临床标本进行验证。
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