新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)是新生儿期常见的疾病，有较高的致残率，在围生期神经系统疾病中占有重要的位置，目前临床对HIE的治疗手段有限，临床疗效不确切。脑红蛋白(NGB)作为一种新型的携氧载体实现血氧向组织的运输，能够特异性地向脑组织供氧，参与神经系统氧的摄取、运输和利用等生理过程，脑缺氧缺血可诱导其在短时间内特异性增高。在缺氧缺血性脑损伤中，NGB在保护神经元等方面起到重要作用 j。目前国内外关于NGB的研究主要集中在动物实验，而在临床研究尤其是新生儿疾病中的研究报道很少。本研究针对临床确诊病例，观察患儿血清NGB动态表达规律，探讨其与HIE预后的相关性。

 

　　1 资料与方法

　　1．1 一般资料选择2010年5月至2011年6月住院的HIE患JL44例为HIE组，男31例，女13例，胎龄(38．3±2．12)周，出生体质量3．1—3．9 k根据2004年长沙会议修订的《新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准及临床分度》，其中轻度22例，中度l4例，重度8例。选择正常足月新生儿1O名为对照组，男5名，女5名，胎龄(38．3±2．12)周，出生体质量3．1～3．9 kg，无围生期窒息史、无代谢性疾病史，且除外核黄疸及中枢神经系统畸形，其母妊娠期健康。对照组新生儿在胎龄、出生体质量、性别、采血年龄等与HIE组均有可比性。

 

　　1．2 方法

 

　　1．2．1 标本采集对每例患儿分别于出生后3 h、3 d及7 dE集静脉血2 ml，不抗凝采血管保存，室温静置30 min，4℃ 4 000 r／min离心10 min，吸取上层血清一80℃保存。

 

　　1．2．2 试剂和材料人脑红蛋白固相酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(上海西唐生物科技有限公司)、8O．2型离心沉淀机(上海香术器械厂)、冷冻冰箱、恒温水浴箱等。ELISA检测患儿出生后3 h、3 d及7 d血清NGB水平。实验步骤依试剂盒说明书。

 

　　新生儿20项行为神经测定(NBNA)检测工具有：小手电筒、红色塑料方形盒、红色小球各一个。

 

　　1．2．3 测试方法(1)血清NGB测定：应用ELISA测定血清NGB，严格按照产品说明书进行操作。

 

　　(2)NBNA测试：HIE组患儿和对照组新生儿均于采血前由受过专门培训的医生采用鲍秀兰等 制定的20项NBNA测定方法进行测评。在安静、半暗、温暖(室温为22～27℃)的房间内，一般在哺乳1 h后睡眠状态下开始测查，内容共分5个部分，包括行为能力6项，被动肌张力4项，主动肌张力4项，原始反射3项，一般评估3项。评分有3个分度(0、1、2分)，满分为40分。全国多城市研究 提示，正常新生儿NBNA基本项目评分应在37分及以上，低于35分提示有脑损伤，35～36分有脑损伤可疑。

 

　　1．3 统计学方法采用方差分析和q检验及直线相关分析。

 

　　2 结果

 

　　2．1 HIE组患儿和对照组血清NGB的表达HIE患儿随临床分度加重，患儿血清NGB水平渐增高(P<0．01)。出生3 h内，HIE组中、重度均高于对照组和轻度HIE组(P<0．01)。出生后3 d、7 d3组HIE患儿血清NGB均降至较低水平(P<0．01)，其中，3 d时，HIE轻、中度组差异无统计学意义(P>0．05)。但出生后3 d时，HIE轻、中度组均明显低于HIE重度组(P<0．01)；而出生后7 d时，HIE中度组明显低于HIE重度组(P<0．01)。

 

　　2．2 NBNA评分比较3组HIE患儿急性期和恢复期NBNA评分均明显低于对照组(P<0．01)；而3组HIE患儿急性期和恢复期NBNA评分均随着病情加重而明显降低(P<0．01)。

 

　　2．3 HIE组急性期及恢复期血清NGB水平与NBNA评分相关分析HIE组急性期和恢复期血清NGB水平与NBNA评分均呈负相关关系(r分别为一0．754和一0．700，P<0．01)。

 

　　3.讨论新生儿HIE在围生期神经系统疾病中占有重要位置。相关研究 报道，足月儿HIE的发生率为6／1 000，有1／1 000死亡或遗留严重的神经系统功能障碍。我国每年活产婴1 800万至2 000万，窒息的发生率为13．6％ ，其中伤残者15．6％，每年发生30万残疾儿童，严重危害我国儿童生活质量。为了更好预防、尽早发现、及时治疗该病，寻找早期诊断HIE特异性相对较高的指标或方法显得十分必要。NGB是近年来发现的与血红蛋白和肌红蛋白同一蛋白家族的第3类重要的携氧蛋白，主要在神经组织广泛表达，参与神经元的储氧、运氧，可提高神经元内的氧分压，与神经元的存活密切相关。正常情况下血清或脑脊液中NGB含量很低，但当脑缺氧缺血损伤时，细胞的完整性受到破坏，且血脑屏障的通透性增加，脑红蛋白渗漏并出现在血清或脑脊液中，使其含量发生明显变化。在脑缺氧缺血状态下，脑红蛋白及mRNA水平表达增加，对神经元有重要的保护作用。检测血清的NGB水平变化可以早期检测HIE的发生，并在一定程度上反映出神经元损伤和修复的情况，对于脑损伤程度和预后估计有重要意义。

 

　　本实验中，对照组和HIE组在出生后NGB水平增高，3 d后降至较低水平，提示新生儿窒息能导致大脑缺氧缺血性损伤，从而诱导NGB表达增加。动物实验中存在类似的表现，在急性脑缺血缺氧状态下，NGB在mRNA水平和蛋白水平表达增高，其中6 h开始增高，24 h达到高峰，48 h开始下降，72 h恢复正常水平。但HIE组在出生后2 h内NGB明显高于对照组，12 h时NGB浓度明显降低，后又逐渐增高，而在大鼠缺血缺氧损坏后早期(15min内)脑组织脑红蛋白的mRNA水平明显升高，然后又迅速下降，变化趋势相似。有学者认为，NGB表达上调所提供给脑组织的氧代偿能力是有限度的，因此表达上升后呈现下降趋势，提示当缺氧程度超过机体的代偿能力时，脑红蛋白表达迅速下降，脑细胞发生不可逆损伤甚至死亡。本文观察了3组不同的NGB表达水平，反映了不同程度的缺氧缺血性脑损伤，与不同程度的临床表现呈正相关。

 

　　本研究结果显示，对照组、HIE组急性期血清NGB水平，各组间有显著差别。其中HIE组显著高于对照组，这与以往的报道一致。

 

　　窒息缺氧是围生期足月儿脑损伤最常因，当脑部缺氧缺血时，患儿神经行为会先于神经系统器质性变化发生改变。NBNA评分是一套广泛开展并己被普遍接受的新生儿行为神经检查评价方法。其目标是早发现、早诊断、早治疗脑损伤的高危儿，减少小儿因缺氧缺血所致的脑瘫、智力低下等神经系统损伤后遗症的发生。本研究中HIE组与对照组比较，轻、中和重度HIE组NBNA评分与对照组差异均有统计学意义(P<0．01)；轻、中、重度组间NBNA评分差异亦有统计学意义(P<0．01)。临床表现越重，NBNA评分越低，两者呈明显正相关关系。

 

　　HIE的发病机制极为复杂，临床医生应将患儿的临床表现与客观检查指标相结合，更利于早期诊断予以相应治疗。本研究显示，HIE患儿血清NGB值随着病情的恢复，虽有所降低，但仍区别于对照组，NBNA评分较前提高。血清NGB值、与NBNA评分结合可作为HIE早期评价脑损伤程度及脑损伤恢复的综合指标；有利于早期发现脑损伤，估计预后，以便进行早期干预。

 

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