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尿液中阴道加德纳菌的分离培养及药敏试验

时间:2014-11-19 10:06来源:作者:点击:
  阴道加德纳菌(gardnerella vaginalis,GV)是由Gardner和Duke于1955年从女性阴道炎者病灶分离到的杆菌。国外学者认为GV是引起妇女细菌性阴道病(bacterial vaginosis,BV)的主要病原菌,与性传播有关,也可引起绒毛膜炎、子宫内膜炎、急性输卵管炎、不孕症、早产等,还可引起尿道炎。但由于该菌生长要求苛刻,在尿细菌培养中往往因其生长缓慢而易被漏检。本文回顾分析65例患者的检验结果,分析GV在泌尿系感染中的临床意义和常规治疗途径。
 
  1 材料与方法
 
  1.1 标本来源 我院2011年1月~2013年6月临床送检的5 164份中段尿细菌培养标本,采集方法由护士消毒患者外阴,留取中段尿至无菌试管内,2 h内送检。
 
  1.2 试剂与仪器 法国梅里埃VITEK-2compart微生物鉴定仪;哥伦比亚血平板购自梅里埃;HMH药敏平板购自广州迪景;药敏纸片购自OX—OID。尿液GV培养与菌落计数进行菌种鉴定及药敏试验。
 
  1.3 尿液GV的分离鉴定 取患者中段尿10 1定量接种至哥伦比亚血琼脂平板,在5 oA(v/v)CO。培养箱中35℃ 孵育24~ 48 h,菌落计数>
 
  1O CFU/m1进行下一步试验。挑取可疑菌落做革兰染色、氧化酶和触酶试验阴性后在血平板分纯,用梅里埃NH卡片进行鉴定。
 
  1.4 药敏试验与分析方法 采用K-B纸片扩散法:配制0.5麦氏比浊度菌液,用无菌棉拭子蘸取所配制菌液,均匀涂布至HMH 琼脂培养基平板上,待表面干后贴上头孢呋辛、复方新诺明、氨苄西林、氯霉素、环丙沙星、头孢曲松、阿奇霉素纸片,35℃ 5 9/6(v/v)CO。培养箱中孵育18~24 h后读取结果,如果生长不足再延长至48 h。参照CLSI流感嗜血杆菌的判断标准进行判断。用WH0一NET5.6分析软件进行分析。
 
  1.5 临床资料 回顾调查GV 阳性患者在做尿细菌培养同时或前两天之内尿常规中的白细胞计数。
 
  2 结果
 
  2.1 中段尿培养结果 2011年1月~2Ol3年6月送检的中段尿培养为5 164份,有菌生长2 729份,培养出GV有68份、65人次(3名患者连续两次培养出GV),该菌的分离率为2.49% 。
 
  2.2 药敏试验根据CLSI流感嗜血杆菌的K—B纸片琼脂扩散法的操作要求和判断方法。
 
  2.3 GV 阳性患者的资料65名患者男性11人,女性54人,年龄从23岁~84岁,平均年龄为44.5岁。尿常规白细胞计数患者在首次检出GV的两天内都曾做过尿常规检测,白细胞计数为3.2~911.5/HP,平均为81.17/HP。
 
  3 讨论阴道加德纳菌一般被认为是细菌性阴道病的主要致病菌,由于对该菌认识的争议曾几经易名。1955年Gardner和Dwkes将该菌命名为阴道嗜血杆菌(B.Hemophilus Vaginalis,HV)。但以后认为该菌与嗜血杆菌属不同,1963年Zinneman和Turner建议重新分类归入棒状杆菌,命名为阴道棒状杆菌(Corynebacterium Vaginale,CV)。
 
  1980年Greenwood和Pickett建议以Gardner命名为加德纳菌属,改称阴道加德纳菌(GardnerllaVaginalis,GV)。该菌的致病性目前报道的有可引起盆腔炎、异常子宫出血和子宫内膜炎、妇科手术后感染、宫颈癌、HIV的感染、不育和流产、羊膜绒毛膜炎、胎膜早破、早产和低出生体重儿、产后子宫内膜炎及剖宫产后伤口感染等。但关于该菌引起的泌尿系感染目前报道的不多,尚未引起广泛关注。
 
  本院在近两年半的时间内分离自尿培养的阴道加德纳菌共68株,来源于65名患者,占尿标本细菌构成比的2.49 。按此构成比看来,由GV引起的泌尿系感染是比较少的,但笔者认为有以下几点可能是造成GV低检出率的原因:① 中段尿培养时间不足。常规中段尿培养时间为24~48 h,若48 h后无细菌生长且阻可报告“培养48 h,无细菌生长(或<10 cfu/m1)”。但阴道加德纳菌生长要求苛刻,需在含血培养基、5 (v/v)CO 环境中孵育48 h才可见针尖大小的菌落,3~4天以后才可形成狭窄的p_溶血环。因而很多中段尿培养等不及它形成较为明显的菌落已经按“培养48 h,无细菌生长(或<10 cfu/m1)”报告临床,这是造成该菌漏检的主要原因。②微生物工作人员对该菌的认识不足。GV 因其细胞壁的独特性,革兰染色难以确定是阳性还是阴性杆菌,因而对下一步的鉴定是个阻碍。有些微生物工作人员对GV的鉴定无从下手,或者认为是阴道分泌物导致的污染而直接忽略不计,也是造成该菌低检出率的原因。③GV鉴定困难。该菌触酶、氧化酶、吲哚及尿素均阴性。目前本实验室是通过VITEK一2compart的NH卡片来鉴定此菌,但NK卡片要求菌液浓度需达到3MC单位,这对生长缓慢,菌落细小的阴道加德纳菌无疑是个大难题。以上三点原因是笔者对本实验室情况的总结,相信很多基层(如缺乏CO2培养箱)的医院同样存在此类问题,也是目前较少报道由尿标本分离到阴道加德纳菌的原因。
 
  阴道加德纳菌可通过性交途径感染男女患者。本调查发现在65名GV 阳性的患者中有11名为男性,平均年龄约42岁;54名女性,平均年龄约45岁。由于未对患者性伴侣进行调查,无法确定男性患者感染的GV是否来源其性伴侣,但有报到指出15 年轻且性活跃女性罹患GV感染,患者配偶或性伴侣GV 培养阳性率高达79.92%。本文回顾性调查GV阳性患者的所有检验结果,发现这些患者在送检尿培养的同时或前两天内均有查过尿常规,65名患者尿白细胞计数仅有1人在正常范围(0~5/HP)内,其余人尿WBC> 5/HP,平均WBC为81.175/HP,说明这65例送检尿培养患者均怀疑泌尿系感染。而患者在留取标本时均经过严格消毒,弃去前段尿,只留取中段尿用于细菌培养;同时经过48 h的培养只选取的细菌量均为> 10 cfu/ml用于后续的鉴定及药敏,较好的避免干扰和污染,确保所培养的GV为泌尿系感染的病原菌。
 
  由于CLSI上没有阴道加德纳菌的判断标准,又因GV最开始归属于嗜血杆菌,因而本实验室借用嗜血杆菌的判断标准用在该菌之上。通过药敏试验发现氨苄西林及头孢类均有较高敏感性。临床上常用甲硝唑来治疗阴道加德纳菌,也有文献报道,氨苄西林虽然用来治疗阴道内的GV效果不佳,但用来治疗泌尿系的GV感染其敏感性与甲硝唑相当,且副作用较小。
 
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