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　　1  仪器与试药
　　Agilent1100高效液相色谱仪(包括G1313A自动进样器,G1315ADAD检测器,G1311A四元剃度洗脱泵,G1316A柱温箱,色谱工作站)；BP2110电子分析天平(德国Sartorius 1/100 000)；KQ-300VDB超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。甲醇为色谱纯,水为双蒸水。藤黄酸对照品、新藤黄酸对照品均由安徽中医学院药物研究所提取分离,HPLC归一化法测定其纯度,分别为99.3%和99.9%。
　　2  方法与结果
　　2.1  色谱条件
　　色谱柱：大连依利特产Hypersil ODS (5 μm,4.6 mm×250 mm)；流动相：甲醇-0.1%冰醋酸水溶液93∶7；流速1.0 mL/min；检测波长：360 nm；柱温：25 ℃；进样量：25 μL。在该色谱条件下,新藤黄酸和藤黄酸的保留时间分别为5.5、7.5 min。理论塔板数按新藤黄酸计算不低于3 000,新藤黄酸和藤黄酸分离度均大于1.5。色谱图见图1。
　　2.2  样品溶液的制备
　　将藤黄原料药粉碎,过40目筛,取藤黄药材粉末0.2 g,精密称定,置于50 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,超声提取20 min后,补足甲醇至刻度,精密吸取1 mL至10 mL容量瓶中,定容至刻度,经0.45 μm微孔滤膜过滤,滤液作为供试品溶液。
　　2.3  对照品溶液的制备
　　精密称取藤黄酸对照品9.8 mg和新藤黄酸对照品各10.2 mg,置于10 mL容量瓶中,加甲醇定容,精密移取0.5 mL至10 mL容量瓶中,制成每1 mL分别含0.049 mg和0.051 mg的混合溶液,作为对照品溶液。
　　2.4  线性关系考察
　　精密量取“2.3”项下对照品溶液0.5、1、2、4 mL置10 mL容量瓶中,加甲醇定容,分别吸取25 μL注入液相色谱仪,在360 nm波长下测定。以峰面积积分值为纵坐标、对照品浓度(μg)为横坐标作图及回归处理,得藤黄酸和新藤黄酸回归方程,分别为：Y＝11 334.8＋232 781X,r＝0.999 9(n＝5)；Y＝75 197.5＋226 301X(r＝0.999 7,n＝5)。结果表明：藤黄酸在2.45～49 μg、新藤黄酸在2.55～51 μg范围内呈良好线性关系。
　　2.5  稳定性试验
　　室温下,精密吸取已知浓度的藤黄粗提物溶液25 μL,于0、0.5、1、2、3、4、5 h进样测定,结果藤黄酸和新藤黄酸峰面积的RSD分别为0.66%和0.94%,表明供试品溶液在5 h内稳定。取已知含量的藤黄药材(藤黄酸30.21%、新藤黄酸11.59%)粉末约0.2 g,6份,精密加入藤黄酸及新藤黄酸含量80%、100%、120%的藤黄酸和新藤黄酸,按照“2.2”项下供试品溶液制备方法制备,回收率测定用加样样品并依法测定。结果见表1。精密称取同一批藤黄药材0.2 g,6份,按照“2.2”项下条件制成供试品溶液,按上述色谱条件测定。除超声方法提取外还考察了另一种提取方法：精密称取细粉0.2 g,加甲醇50 mL,回流0.5 h, 精密吸取1 mL至10 mL容量瓶,定容至刻度,经0.45 μm微孔滤膜过滤,进样,结果藤黄酸与新藤黄酸含量分别为30.89%(RSD＝2.8%,n＝3)和11.03% (RSD＝3.4%,n＝3),含量与超声方法提取并无显著性差异,但超声方法提取简便、省时。超声时间确定中,取同一批制剂分别超声10、20、30 min及1 h,结果超声20、30 min与1 h测定结果并无显著性差别。