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　　肉豆蔻主要含有挥发油、脂肪油、木脂素类等多种有效成分,本试验采用HPLC法对其进行指纹图谱的初步研究。指纹峰不仅包含非挥发性成分,还能包含挥发性成分,化学成分检测的较多,相比采用气相色谱法,更能代表肉豆蔻化学成分的整体性。肉豆蔻药材多为进口,其产地、贮存时间等不太明确,在指纹图谱研究中发现虽然相似性均在0.9以上,但10批商品肉豆蔻药材共有指纹蜂相对峰面积变化变异较大,同时也反映不同地区商品肉豆蔻化学成分及本身个体种仁间也可能存在差异,还需进一步研究。
　　1  材料
　　1.1  仪器
　　Agilent1100高效液相色谱仪(chemistation system工作站)。
　　1.2 试药
　　去氢二异丁香酚对照品[2],沈阳药科大学提供,经高效液相色谱法面积归一化法测定,纯度>98.0%；肉豆蔻药材购于不同地区,经鉴定为肉豆蔻科植物肉豆蔻(Mystica fragrans Houtt.)的干燥种仁,肉豆蔻对照药材购于中国药品生物制品检定所,批号120926-200304。甲醇、乙腈为色谱纯,水为重蒸水。
　　2  方法与结果
　　2.1  色谱条件
　　色谱柱为ZORBAX EclipseXDB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相：甲醇-乙腈-水(25∶35∶40),流速1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：270 nm。
　　2.2  参照物溶液的制备
　　精密称取去氢二异丁香酚对照品适量,加甲醇制成每1 mL含去氢二异丁香酚0.10 mg的溶液,即得。
　　2.3  供试品溶液的制备
　　取肉豆蔻粉末(过40目筛)0.5 g,精密称定,置具塞三角瓶中,精密加入甲醇25 mL,称定重量,超声处理30 min,取出,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液过0.45 μm滤膜,即得供试品溶液。
　　2.4  检测方法
　　参照[《中华人民共和国药典》2005年版(一部)附录ⅥD]试验,分别精密吸取参照物溶液及供试品溶液各10 μL,注入液相色谱仪,记录70 min的色谱图,即得。
　　2.5  试验
　　精密称取同一批样品各5分,分别按供试品溶液制备方法,精密吸取各供试品溶液10 μL,分别注入液相色谱仪,测定指纹图谱。采用中药色谱指纹图谱的相似性计算软件对5次测定结果进行计算,结果各供试品色谱图其相似度均为0.9以上,表明方法的重复性良好,符合指纹图谱要求。精密吸取同一供试品溶液5 μL,按0、2、4、6、8、12、24 h所建立的测定条件进行检测,采用中药色谱指纹图谱的相似性计算软件对所得结果进行计算,其相似度均为0.9以上,结果表明,在24 h内肉豆蔻的色谱指纹图谱基本稳定,没有明显的变化,符合指纹图谱的要求。
　　2.9  指纹图谱的建立及分析(见图1～图4)
　　按上述方法检测10批肉豆蔻的指纹图谱,结果表明,10批肉豆蔻药材的指纹图谱有17个比较稳定的特征峰,其中4号峰为去氢二异丁香酚色谱峰。由相似度评价结果可以看出,10批不同地区商品肉豆蔻药材HPLC指纹图谱的相似度均在0.9以上,未发现离群样本。表明各药材之间相似性良好,初步说明目前各地区市售的商品肉豆蔻药材无差异性,质量较为稳定。