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　　1 仪器与试药
　　UV-1601紫外-可见分光光度仪（日本岛津）；BS 224S 电子天平（十万分之一，德国赛多利斯）；AEG-45SM电子分析天平（日本岛津）；HH-S型水浴锅（巩义市予华仪器有限责任公司）。熊果酸对照品；齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110709-200505），其余试剂均为分析纯。
　　2 方法与结果
　　2.1 对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每毫升含齐墩果酸0.845 mg的溶液，作为对照品溶液。
　　2.2 供试品溶液制备方法的考察
　　2.2.1 提取溶媒和水解方式的考察[2]取翼首草粉末（过2号筛）约0.1 g，精密称定，分别加无水乙醇30 ml，甲醇30 ml，再加浓盐酸3 ml，于80℃水浴回流2 h，滤过，滤液蒸干，残渣加蒸馏水10 ml超声溶解，用醋酸乙酯振摇提取4次，10 ml/次，合并醋酸乙酯液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇转移至10 ml量瓶中，并加无水乙醇稀释至刻度，得供试品溶液A，B。
　　精密吸取供试品溶液A、B、C、D各适量于具塞试管中，按“2.3”项下依法显色测定吸光度，计算含量分别为6.07%，5.38%，1.47%，1.69%。结果表明，提取溶媒为无水乙醇，加3ml浓盐酸，回流提取和水解同步进行时，所得总皂苷含量最高。
　　总结供试品溶液制备方法：取翼首草粉末（过2号筛）约0.1 g，精密称定，加无水乙醇30 ml，浓盐酸3 ml，于90℃水浴回流3 h，滤过，滤液蒸干，残渣加蒸馏水10 ml超声溶解，用醋酸乙酯振摇提取4次，每次10 ml，合并醋酸乙酯液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇转移至10 ml量瓶中，并加无水乙醇稀释至刻度，即得。
　　2.3 标准曲线的制备精密吸取“2.1”项下齐墩果酸对照品溶液30，36，42，48，54 μl于具塞试管中，水浴蒸干，分别精密加入5%香草醛冰醋酸溶液0.6 ml，70%硫酸溶液5 ml，摇匀，于70℃水浴加热40 min，取出，冰水浴冷却1 h，室温放置1 h，以相应试剂为空白，于535nm处测定吸光度。以齐墩果酸的含量（μg）为横坐标（X）、齐墩果酸吸光度（A）为纵坐标（Y），绘制标准曲线，计算得直线回归方程为：Y=0.014 1X+0.042 0（r=0.999 9）。结果表明，齐墩果酸在25.35～45.63 μg范围内，线性关系良好。
　　2.4 精密度考察 取同一对照品溶液，按“2.3”项下方法重复测定吸光度6次，计算得RSD为0.097%。结果表明，仪器精密度良好。
　　2.5 稳定性考察 精密吸取“2.1”项下齐墩果酸对照品溶液30μl，“2.2.6”项下过2号筛供试品溶液60 μl于具塞试管中，按“2.3”项下方法显色。计时测定，隔30 min测定一次吸光度值，共测定3 h，计算得RSD分别为0.92%和0.75%。结果表明，对照品溶液及供试品溶液在显色操作完成后3 h内稳定。取翼首草粉末（过2号筛）约0.1 g（6份），精密称定，按拟定的供试品溶液制备方法操作，精密吸取所得供试品溶液各60 μl，再按“2.3”项下方法测定吸光度，计算得平均含量为6.58%，RSD为1.21%。结果表明，此方法重复性良好。
　　本实验首次详细考察了影响翼首草总皂苷提取的6个主要因素，分别是提取溶媒和水解方式、溶媒用量、提取温度、水解时间、萃取次数、药材粉碎度。确定了最佳制备方法，其中提取溶媒和水解方式对总皂苷提取的影响最大。