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　　1  仪器与试药
　　UV-757CRT紫外分光光度计（上海UNICO），AB135-S电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司），CQ-250超声波清洗器（上海超声仪器厂），电热恒温水浴锅，索氏提取器。芦丁对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号10080- 200306）。本研究所用大乌泡叶于2007年7月采集于贵州省黔西南州普安县，经秦文杰副研究员鉴定为蔷薇科悬钩子属大乌泡（Rubus multibracteatus Levl.et Vant.），标本存放于中药复方新药开发国家工程研究中心。甲醇为分析纯，5%亚硝酸钠、10%硝酸铝、4%氢氧化钠等均采用分析纯自配。
　　2  方法与结果
　　2.1  供试品溶液的制备
　　干燥大乌泡叶粉末约2.0 g,精密称定，置索氏提取器中，加入60%甲醇100 mL,于恒温水浴锅上90 ℃提取6 h,过滤，减压浓缩并定容至50 mL容量瓶中，得供试品溶液。精密称取干燥至恒重的芦丁对照品4.75 mg,用少量60%甲醇溶解，置50 mL容量瓶中，用60%甲醇定容至50 mL,摇匀，静置，配成浓度为95 μg/mL的芦丁对照品贮备液。
　　2.2  测定波长的选择
　　以芦丁为对照品测定大乌泡叶中总黄酮的含量。精密吸取对照品液、供试品液各适量分别加入到25 mL容量瓶中，按“2.4”项下方法操作，并在400～600 nm范围内扫描，结果均在510 nm处有最大吸收波长，其他成分对测定无干扰，故选择510 nm为测定波长。
　　2.3  标准曲线的绘制
　　精密吸取浓度为95 μg/mL的芦丁对照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL,分别置于25 mL量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液1.0 mL,摇匀，放置6 min后各加入10%硝酸铝溶液1.0 mL,摇匀后放置6 min,分别加入4%氢氧化钠溶液10 mL,用60%甲醇稀释至刻度，摇匀，放置10 min,在510 nm处测定吸光度。回归方程为：Y＝0.001 2X＋0.001,r＝0.999 6。结果表明，芦丁对照品溶液浓度在95～570 μg/mL之间呈良好的线性关系。
　　2.5 方法学考察
　　2.5.1  试验
　　精密称取样品6份，每份约2.0 g,精密称定，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，每份精密吸取1.0 mL,分别置于10 mL容量瓶中，按“2.4”项下方法进行显色和测定，记录吸光度值，计算每份样品的含量。6份样品黄酮含量的RSD＝2.11%（n＝6）。精密称取样品6份，每份约2.0 g,按“2.1”项下方法制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液1.0 mL,共6份，分别置于10 mL量瓶中，按“2.4”项下方法进行显色和测定，分别在15、20、30、45、60、100 min测定，RSD＝1.38%（n＝6）。结果表明样品在15～100 min之间稳定。
　　2.2  样品含量测定
　　精密称取样品6份，每份约2.0 g,按“2.1”项下方法制备供试品溶液。每份精密吸取1.0 mL,分别置于10 mL量瓶中，按“2.4”项下方法进行显色和测定，由标准曲线计算得大乌泡中总黄酮平均含量为3.8%,RSD＝2.4%,说明该方法测得的含量是可靠的。表2  大乌泡叶中总黄酮含量测定结果（略）