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　　1  仪器和试药
　　高效液相色谱仪，包括SP8800高效液相泵，Sepetra Focus紫外检测器，威玛龙色谱数据工作站，甲醇、磷酸为分析纯等。超声仪（Autosience仪器有限公司）。款冬花药材购于天津饮片厂，经天津药物研究院中药现代研究部张铁军研究员鉴定为菊科植物款冬花 Tussilago farfara L.的干燥花蕾。芦丁标准品（天津市药品检验所），试剂均为分析纯（天津康科德科技有限公司）。
　　2  方法与结果
　　2.1  款冬花提取工艺
　　2.1.1  正交设计通过预实验得知影响提取的主要因素为时间（A）、加水倍量（B）和提取次数（C），为进一步优选各因素最佳工艺水平，设计正交实验，以芦丁提取率和出膏率为指标，采用L9（34）正交表优选水提款冬花的最佳提取工艺条件。因素水平设计见表1。
　　2.1.2  实验方法及结果称取20 g款冬花药材共9份，采用L9（34）正交表安排实验，测定出膏率及芦丁提取率，并充分考虑二者关系及对真实结果的影响，利用提取率与出膏率之和作为综合加权评分［4］，得出综合评分。具体实验结果见表2。为了进一步确定各因素对结果的影响大小，对实验结果进行了方差分析。结果如表3所示。从上述结果分析可以看出，则3因素的影响大小依次为C>B>A, C具有显着性。从省时降耗及生产实际出发，在保证提取充分的前提下，综合分析各个因素对芦丁的提取率和出膏率的影响，拟定最佳工艺为10倍水量，煎3次，1.5 h/次。
　　2.1.3  水提正交实验的验证按照确定的优选工艺重复验证3次，测得平均提取率为85.53%，平均出膏率为25.95%，证明优选工艺数据可靠。
　　2.2  款冬花配方颗粒的制备取1 500 g款冬花药材，按正交实验所定最佳工艺条件提取，合并滤液，浓缩。按照理论干膏和辅料比1∶1加入淀粉，用75%乙醇适量制成软材，制粒干燥，即得款冬花配方颗粒成品。
　　2.3  芦丁含量测定
　　2.3.1  对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品适量，加流动相制成每毫升含0.10 mg的溶液，分别精密吸取1，2.5, 5, 7.5,10,12.5 ml 置于100 ml量瓶加流动相稀释至刻度，备用。
　　2.3.2  供试品溶液的制备精密称取款冬花配方颗粒约0.2 g，置量瓶中，加甲醇50 ml，超声30 min，滤过，放冷，转移至100 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。
　　2.3.3  线性关系考察精密吸取上述芦丁对照品溶液10 μl，进样，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂；以甲醇：0.1％磷酸水溶液（50∶50）为流动相；检测波长为360 nm；理论板数按芦丁峰计算应不低于4 000。记录峰面积。以峰面积为纵坐标，芦丁进样量为横坐标绘制标准曲线，得线性回归方程为：Y=391 982X + 19 143,r＝0.999 8，表明芦丁在1～12.5 μg与峰面积具有良好的线性关系。
　　2.3.4  精密度实验分别精密吸取上述供试品溶液10 μl，按上述色谱条件进行测定芦丁的峰面积，计算得RSD=0.52％（n＝6）。
　　2.3.5  稳定性实验精密称取款冬花配方颗粒约0.5 g，按“2.3.2”项方法制备供试品溶液。精密吸取上述供试品溶液10 μl，分别在0,2,4,8,12，24 h进样，按上述色谱条件进行测定芦丁的峰面积，计算得RSD=1.34％（n＝6）。结果表明，样品在24 h内稳定。
　　3  结论
　　本实验对款冬花配方颗粒的制备工艺进行了研究。通过正交实验法，确定最佳提取条件，并为其制定了简便适用的的质量控制方法。通过对颗粒的各项检查，结果均符合《中国药典》2005年版关于颗粒检查项下规定。所制得的颗粒工艺合理，指标成分明确，质量稳定可控。
　　关于指标成分的选定：款冬花中芦丁含量较高，芦丁又是治疗咳喘症的重要药物，所以选用芦丁作为款冬花配方颗粒的指标成分。HPLC法测定款冬花中芦丁的含量，方法准确，重复性好，安全稳定，不需要复杂的仪器设备，可用于款冬花配方颗粒的质量控制。并且本实验采取两项指标综合加权评分的方法［4,5］确定最佳工艺，更为合理。