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1  仪器与试药
　　Waters 515高效液相色谱仪；国家药典委员会2004年A 版“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”。色谱纯甲醇，试验用水为纯净水，其他试剂均为分析纯。异长春花苷内酰胺对照品（中国药品生物制品检定所，110831-200302）；胆木药材共10批，采自海南五指山地区栽培地不同区域，经中国医科院兴隆分所陈伟平教授鉴定。
　　2  方法与结果
　　2.1  色谱条件色谱柱为Diamonsil TM C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；检测波长为227 nm；柱温为30℃；流动相为甲醇-0.10%磷酸水溶液，二元梯度洗脱，洗脱时间为70 min， 流速为1.0 ml/min；进样量为20 μl，所有组分在70 min内出峰完毕。梯度洗脱条件见表1。
　　2.2  溶液制备
　　2.2.1   对照品溶液制备精密称取异长春花苷内酰胺对照品适量，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶液适量溶解，并定容至刻度，配制成质量浓度大约为160 μg/ml的对照品溶液。表1  梯度洗脱条件（略）
　　2.2.2   供试品溶液制备取胆木药材0.5 g，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，加入70%乙醇50 ml，称重，于沸水浴中加热回流40 min，放冷，称重，用70%乙醇补足减失的质量，滤过，取续滤液适量，以0.45 μm 微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
　　2.3  方法学考察
　　2.3.1  精密度实验取同一份供试品溶液，连续进样6次，记录其图谱。计算各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的RSD。 结果表明，RSD分别为0.09% ～0.21%和0.19%～2.55%,均小于3.0%，符合指纹图谱的要求。
　　2.3.2  稳定性实验取同一份供试品溶液，分别于制备后0, 2, 4, 8, 16, 24 h进样，记录其图谱。计算各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的RSD。 结果表明，RSD分别为0.06%～0.23%和0.21～2.68%，均小于3.0%,符合指纹图谱的要求。
　　2.3.3  重复性实验取同一批次的胆木6份，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，分别进样，记录其图谱。计算各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的RSD。 结果表明，RSD分别为0.08%～0.22%和0.21%～2.94% ,均小于3.0% ,符合指纹图谱的要求。
　　在我国已用胆木制成注射液及胆木浸膏片，治疗钩端螺旋体和上呼吸道感染［1］。文献报道［2，3］海南胆木中有效成分为生物碱类，其中异长春花苷内酰胺（isovincosidelactone）含量较高。提取溶剂的选择取同样量的海南胆木药材分别采用纯乙醇，70%乙醇，50%乙醇，70%甲醇，50%甲醇进行加热回流提取，并将提取液进行HPLC分析。结果表明，以70%乙醇提取液的色谱峰强度最大，故选择70%乙醇为提取溶液。