医学临床研究杂志投稿：
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【摘要】 目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）转录体在早期诊断HBV母婴传播中的意义， 并观察母亲抗乙型肝炎病毒免疫球蛋白（HBIG）免疫阻断治疗对新生儿血清HBV转录体的影响．方法：治疗组46例HBV表面抗原（HBsAg）阳性孕妇自孕26 wk开始行抗HBV免疫治疗（HBIG im, 200 IU/4 wk; 同时使用左旋咪唑涂布剂10 mg/wk）；另23例HBsAg）阳性孕妇做为对照组未给予任何抗病毒治疗. 从孕妇治疗前血清及其新生儿血清中提取核酸，经PCR及RTPCR扩增HBV DNA，全长型RNA （fRNA）和顿挫型RNA（trRNA），琼脂糖凝胶电泳显示产物，Southern杂交进一步验证扩增产物. 结果： HBV DNA阳性仅存在于未接受免疫治疗的母亲所生新生儿中； 超过半数的新生儿血清中可检测到病毒转录体RNA， 并与其母亲是否接受免疫阻断治疗无关. 但是，治疗组母亲所生新生儿中仅可检测到顿挫型病毒转录体trRNA. 结论： 血清HBV转录体可早期诊断新生儿HBV感染的状态； 新生儿血清中trRNA的转录模板可能为新生儿体内的病毒DNA; HBIG免疫阻断治疗不能阻断HBV宫内感染，但可以阻止高复制性感染的发生.
1材料和方法
　　1.1材料
　　1.1.1病例选择69例HBsAg阳性孕妇分为治疗组46例及未治疗组23例. 69例孕妇孕期均无先兆流产史无急性或慢性肝炎病史症状及体征无肝功能受损情况.  孕妇年龄孕产次胎龄均无明显差异. 69例孕妇分娩新生儿69(男36，女33)例.
　　1.1.2试剂高纯度核酸提取试剂盒、核糖体RNA (rRNA)、单管RT/PCR试剂盒、地高辛探针标记及原位杂交试剂盒均购自Roche公司(Mannheim, 德国)，原位杂交试剂盒、DNase和RNase灭活的吸头购自Biolabs，HybondN+尼龙膜购自Amersham， Taq DNA聚合酶、100 bp DNA Marker及DNase I均为Gibcol产品，DNase和RNase灭活的试管和离心管购自Eppendof公司. 其他常用试剂和药品均为分析纯或电泳级.
　　1.1.3引物和质粒PCR引物由上海生工合成. 用于阳性对照的质粒为40A和41A［13］， 均由德国癌症研究中心病毒与宿主相互关系分部制备.
　　1.2方法
　　1.2.169例HBsAg阳性孕妇治疗方法孕26 wk开始，按来诊次序分为治疗组46例，孕26 wk始孕妇臀大肌注射已型肝炎病毒免疫球蛋白（HBIG ）（上海生物制品研究所生产批号为20000712) 200 IU/4 wk， 同时使用左旋咪唑涂布剂(福建省凯华药业有限公司生产批号为20000307 500 mg/支) 5 mL涂布于上下肢体内侧皮肤易吸收处2次/wk，3 mo一疗程. 未治疗组23例根据患者或其亲属的意见未给予上述任何主动或被动免疫防治措施，孕妇所生的新生儿的乙肝疫苗接种均按第0,1,6月进行.
2结果
　　2.1母亲和新生儿血清中HBV DNA， fRNA(全长型) trRNA(顿挫型)的检测图1所示为4对治疗组母亲新生儿血清中相应的PCR和RTPCR扩增结果［10］. 第1和第2对的母亲DNA，fRNA，trRNA和HBeAg阳性， 第3对的母亲仅DNA和trRNA阳性，第4对的母亲仅trRNA阳性. 而所有4名新生儿仅显示trRNA阳性.
讨论
　　本研究立足于应用血清HBV RNA和DNA区分新生儿的不同感染类型. 既往研究表明，fRNA是一个病毒复制的标志物，而trRNA单独阳性提示无复制阶段的病毒基因表达［8,9,14］. 先前基于肝组织和血清的研究提示，trRNA的来源与染色体整合的和游离的病毒DNA均有一定关系［14-15］. 而新生儿的感染处于病毒感染的早期阶段，此时染色体整合的病毒DNA不占主导地位. 因此更支持游离的病毒DNA为trRNA的转录模板.
　　表2顿挫型RNA在全长型RNA阴性(tr)和阳性(f+tr)母亲/新生儿血清中的表达（略）
　　不难理解，新生儿的HBV感染是由于暴露于受感染母亲体内的病毒所导致的宫内感染. 但是，这种感染不一定伴随高复制阶段. 这可能是由于前基因组RNA缺乏反转录起始位点，原因可能为转录和转录体成熟的相关因素与肝脏的发育程度有关［16］.
　　接受免疫阻断治疗的母亲所生新生儿普遍缺乏fRNA和病毒DNA(以及HBeAg)， 但trRNA阳性较为普遍. 这一方面反映了免疫阻断治疗可以有效预防新生儿的高复制性的感染. 另一方面，治疗组与非治疗组新生儿trRNA阳性率无明显差异，提示病毒感染本身并没有被有效预防. 如果新生儿血清trRNA是宫内感染的产物，我们推测病毒感染和表达的模式可能有两种：一种导致病毒的高复制，而另一种则检测不到病毒的复制. 前者对免疫治疗敏感，而后者不敏感. 但是，后者有可能会转变为高复制状态，这有助于解释部分新生儿在出生后1岁以内甚至更晚出现的“突破性感染”［1,3,17］.