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　　1  材料与仪器
　　1.1  动物健康雄性SD大鼠，体质量（200±10）g ，60只。北京维通利华实验动物技术有限公司提供［许可证编号：SOXK（京）2002－0203］。
　　1.2  药品卵蛋白（ovalbumin OVA）GradeⅡ，购于Sigma公司；灭活百日咳杆菌苗购于北京生物制品研究所；氢氧化铝购于北京市化学试剂公司（批号 20040618）；3.5%水合氯醛，（批号 20050916）西苑医院制剂室提供；泼尼松购于天津力生制药股份有限公司（批号0410086 ）；血清IL-2、IL-4放免试剂盒购于北京华英生物技术研究所（批号20040625 ）；免疫组化试剂盒（SP-9001）美国ZYMED公司；浓缩型DAB试剂盒，北京中杉金桥生物技术有限公司；TGF-β抗体，美国Santa Cruz生物技术公司益肾平喘活血合剂［补骨脂、生地、 川芎、赤芍、炙麻黄、杏仁、穿山龙、茯苓、甘草，由中国中医科学院西苑医院制剂室制备（批号 20050321）］，1ml药液≈4 g生药量，再根据实验要求进行稀释）。
　　1.3  仪器402型医用雾化器，上海合力医疗器械厂生产；80－2台式离心机，上海医疗器械厂生产；全自动RIA16γ免疫计数器，美国Capintec公司生产；石蜡切片机，德国LEICA公司生产；图像分析系统，德国LEICA-Q550CW;偏振光显微镜，德国NIKON公司。
　　2  方法
　　2.1  大鼠分组及哮喘模型的建立哮喘模型的建立：参考Temelkovski等［1～3］的方法，配置成每毫升含OVA 100 mg、Al（OH）3 100 mg、灭活百日咳杆菌约6×109个的溶液。第1步致敏：第1天每只大鼠腹腔注射以上溶液1 ml，第8天重复腹腔注射1 ml。第2步激发：第15天将致敏大鼠置于密闭喷雾箱，给予10g/l的OVA生理盐水溶液，超声雾化，每天激发20 min，连续14 d，制成支气管哮喘模型。
　　60只大鼠随机分为6组，在中国中医科学院西苑医院二级动物室［饲养设施合格证号SYXK（京）2003－0008）开始实验］适应性喂养1周后开始实验。分组：正常对照组（正常组）：腹腔注射及雾化均用生理盐水，每天雾化吸入前20 min用2 ml生理盐水灌胃。空白造模对照组（造模组）：OVA造模后，每天激发前20 min用2 ml生理盐水灌胃。激素对照组（激素组）：OVA造模后，每天激发前20 min用2 ml泼尼松溶液灌胃（每日泼尼松0.3 mg/100 g体质量）。中药实验组（中药低、中、高剂量组）：OVA造模后，每天激发前20 min用2 ml益肾平喘活血合剂灌胃（每日分别按低、中、高剂量组予0.45，0.9，1.8 g生药量/100 g体质量）。
　　2.2  标本的采集各组大鼠在末次激发后24 h内收集标本，用3.5％水合氯醛（1 ml/100 g体质量）腹腔注射麻醉大鼠，腹主动脉取血，静置1 h后，离心机（2 500 r/min）离心15 min，分离血清，分别用放免法按IL-2、IL-4试剂盒使用说明即刻检测。免疫组化ABC法测定TGF-β的表达；用LEICA－Q550CW图像分析系统测定样品中Ⅰ型、Ⅲ型胶原的相对含量，在光镜下（×200）随机取4个单位面积，每组共测24个单位面积，分别测定平均光密度值（OD值）、阳性区域面积（μm2），并计算积分光密度=OD值×阳性面积。
　　3  结果
　　3.1  体征及肺组织形态学观察正常组大鼠呼吸平稳，行动灵活，反应灵敏，体质量稳定增长，毛色光泽。造模组出现呼吸急促，轻度紫绀，行动迟滞或俯伏不动，反应迟钝，体质量减轻，毛色失去光泽。激素组、中药组大鼠体质量增长低于正常组，其它体征变化不明显。肺组织形态学见模型组气道管壁、肺泡隔、气道平滑肌增厚，粘膜下、管壁及肺泡间质均有大量嗜酸性粒细胞、淋巴细胞浸润，管腔狭窄。
　　3.2  放免法测定血清IL-2、IL-4（见表1）。在哮喘持续发作时，大鼠血清中IL-2水平下降，IL-4水平升高。与正常组比较，中药3个组的血清IL-2水平下降，IL-4水平升高均轻于造模组和激素组；与造模组比较有显着差异（P<0.01），与激素组比较无显着差异（P>0.05）；中药组组间比较，高、中剂量组优于低剂量组（P<0.05）。
　　3.3  免疫组化ABC法测定大鼠TGF-β的表达见表2。TGF-β免疫组化造模组反应最强，呈深棕色；激素组及中药3个组阳性反应稍弱，呈棕黄色至浅黄色，正常组呈淡浅黄色。以上结果经图像分析，统计学处理得到光密度值（OD值），各组与正常组比较无显着性差异（P＞0.05），各组与造模组比较有显着性差异（P<0.05～0.01），中药高剂量组与激素组比较有显着性差异（P<0.05）。气道胶原分布和变化采用苦味酸天狼星红染色，偏振光显微镜观察，造模组支气管粘膜及上皮下Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维明显增多；激素组较造模组减少，中药低剂量组改变与激素组类似，中药中、高剂量组胶原纤维沉积少于激素组；正常组可见少量胶原纤维分布。