非酒精性脂肪肝病(nonal coholic fatty liver disease，NAFLD)是除乙醇和其它损肝因素引起的以肝脏脂肪蓄积为主要病理特征，肝细胞脂肪变为主要病理改变的肝脏疾病。近年来，随着生活水平的提高和饮食结构的改变，NAFLD发病率逐渐升高，并且发病年龄有越来越小的趋势。笔者临床研究发现活血化痰方对非酒精性脂肪肝有效好的治疗作用。本研究观察其对非酒精脂肪肝大鼠血清瘦素和脂联素水平的影响，进一步探讨活血化痰方治疗非酒精性脂肪肝的作用机制。

　　1 材料与方法

　　1．1 药物与试剂活血化痰方(由丹参、海藻、泽泻、山楂组成，十堰市人民医院药剂科提供)；二甲双胍片(上海信谊药厂有限公司，批号：1007231)。梭甲基纤维素钠、胆固醇(北京双螺旋藻公司提供)；瘦素(上海原叶生物科技有限公司，批号：CK—E30492R)；酯联素(上海原叶生物科技有限公司，批号：CK—E30584R)。

　　1．2 主要仪器721分光光度计、台式离心机、冷冻离心机、电子精密天平、全自动生化分析仪、超低温保存箱、光学生物显微镜、日本NikonYSZ、石蜡切片机、DK一526恒温水浴锅。

　　1．3 动物健康雄性sD大鼠6o只，鼠龄5—6周，体重130—150g，清洁级(购于湖北医药学院实验动物中心)。

　　1．4 动物分组与造模适应性饲养1周后，大鼠按体重编号，完全随机分为正常组l0只和高脂造模组5o只。正常组予普通饲料喂养，基础饲料配方：面粉20％ 、米粉10％ 、玉米2o％、鼓皮25％ 、豆料2o％ 、鱼粉2％ 、骨粉2％。高脂造模组予高脂饲料喂养，高脂饲料配方：基础饲料77．6％ 、猪油10％ 、胆固醇2．O％ 、胆盐0．2％、丙硫氧嚓咙0．2％、蛋黄粉5％ 、蔗糖5％。均自由饮水。随后将造模大鼠又分为模型组20只，二甲双胍干预组1O只，活血化痰方低、高剂量干预组各1O只。自饲养第8周起，高脂造模组每周随机处死1只大鼠，取肝脏HE染色，至16周末时大鼠达到重度脂肪肝。

　　1．5 给药方法各组大鼠按照10 mL／(kg·d)给药干预。于每日15：130给予正常组、模型组大鼠蒸馏水灌胃1次；活血化痰方高、低剂量组分别予以生药18 kg(含生药量1．8 g／mL)、4．5 g／kg(含生药量0．45 g／mE)灌胃给药1次，相当于临床用药剂量的l8倍、4．5倍；二甲双胍组予以二甲双呱150 ms／(kg·d)灌胃，灌胃给药在予饲料喂养的同时进行。以上用药剂量均参照《现代医学实验动物学》。

　　1．6 观察标本的采取大鼠禁食不禁水12 h，称量大鼠体重，用5％ 的水合氯醛(O．75mL／100g)腹腔注射麻醉后处死，剖腹，在无热原条件下采门静脉血1 mL，注入去热原试管，待检。下腔静脉取血约5—8 mL，以4000 r／min离心5 min，分离血清，置于一70 冰箱待用；迅速分离取出肝脏，称肝湿重，观察大体形态及表面色泽，速取右肝小组织数小块冻存于一80~C冰箱，用于相关检测。

　　1．7 观察项目

　　1．7．1 一般情况及肝指数：观察各组大鼠食欲、毛发、大小便、行为及整体状态，死亡情况，每周定期称量各组大鼠体重，并根据大鼠体重调整给药剂量。计算肝指数：肝指数=肝湿重／体重×100％ 。

　　1．7．2 血清ALT、AST、TG、TC检测：由十堰市人民医院生化室协助测定。

　　1．7．3 血清瘦素、脂联素水平的检测：方法按瘦素、脂联素ELLSA试剂盒说明书步骤进行。

　　1．8 统计学方法采用SPSS17．0软件包进行统计运算，结果以均值±标准差(露4-s)表示，并进行正态分布和方差分析检验。呈正态分布的资料组问进行方差分析，组间两两比较进行L—SD检验，非正态分布的资料按Dunnets法检验。以P<0．05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2．1 一般情况及肝指数正常组大鼠精神良好，行动敏捷，毛发光泽，饮食、二便正常，体重增加较快。模型组、二甲双胍干预组和活血化痰方低、高剂量组体重增加较正常组快，其中二甲双胍干预组、活血化痰方高、低干预组体重较模型组减轻。l6周末各组大鼠体重、肝重量、肝指数的变化见表1。

　　2．2 各组大鼠血清ALT、AST、TG、TC测定结果(见表2)2．3 各组大鼠血清瘦素、脂联素水平的测定结果(见表3)与正常组相比，模型组血清瘦素水平显著升高(P<0．01)；与模型组相比，二甲双胍组和活血化痰方低、高剂量组血清瘦素显著降低(P<0．05)。与正常组相比，模型组血清脂联索水平显著降低(P<0．01)；与模型组相比，二甲双胍组和活血化痰方低、高剂量组血清脂联素水平显著升高(P<0．05)。

　　3 讨论NAFLD是一种由环境、遗传等多因素所致的代谢性疾病，它的发病机制复杂，目前仍然有很多环节尚不清楚。肥胖、高脂饮食在NAFLD的发生发展中起着重要的作用。

　　活血化痰方中丹参、海藻为君药，茯苓为臣药，山楂为佐药，通过君臣佐使的配伍，达到活血化痰、降低血脂、改善肝功的疗效。丹参性味微寒，有活血调经、祛瘀止痛、凉血消痈，除烦安神功效，含丹参酮、丹参素等，有保护CC14引起的肝损伤作用 。

　　能护肝降酶、降低血脂，特别是甘油三酯，并可改善肝脏微循环。

　　丹参成分的提取物，能更好的抑制肝脏炎症反应，改善肝脏微循环，减轻瘀血性缺血状态，增强脂质的代谢与排泄，从而抑制细胞内源性胆固醇的合成及外源性胆固醇的吸收，改善肝脏脂肪代谢，从而达到治疗脂肪肝的目的。李玉梅 认为，丹参具有降低细胞内胆固醇及抗脂蛋白氧化作用。海藻含有蛋白质、氨基酸、维生素多糖类物质和十余种微量元素，具有降压、调脂、降糖、免疫调节等 多方面药理活性，张美稀等 观察到它能降低高脂大鼠体重、肝指数，减轻肝组织的脂肪贮积。山楂味酸、甘微温，人脾胃、肝经。近年来研究发现山楂叶总黄酮能减少非酒精性脂肪肝大鼠脂质过氧化反应，减少细胞因子对肝细胞的损伤；山楂叶总黄酮能抑制CYP2E1活性 ，同时能够抑制肝组织脂质过氧化反应，提高肝细胞的抗氧化能力，从而防治脂肪肝的发展；另有文献报道山楂叶总黄酮可缓解氧化应激从而抑制NF—soB、Itc Bet mRNA和蛋白的表达，减少NF—K B的活化，从而有效防治非酒精性脂肪肝[hi。泽泻气微，味微苦。能利尿渗湿，泄热，化浊降脂。泽泻提取物对兔实验性高胆固醇血症有明显降胆圊醇作用。其机理可能与其干扰外源性胆固醇的吸收和内源性胆固醇代谢有关” 。泽泻能降低血中低密度脂蛋白(LDL)，升高高密度脂蛋白(HDL)，从而防止动脉粥样硬化的发生和发展“ 。

　　瘦素的生理作用主要通过外周和中枢共同发挥其作用，通过改善摄食行为，调节能量代谢和维持体重平衡等对机体的作用。研究表明瘦素是胰岛素抵抗发生的一个独立危险因素 ，Bouloumie等证实瘦素可以提高细胞活性氧的含量，并与剂量呈正相关[1 。张丽经过综合研究，认为瘦索参与脂肪肝形成的发病机理是复杂的。一方面，瘦素缺乏使血游离脂肪酸(FFA)水平升高，超过肝脏代谢能力，导致肝内脂质沉积；另一方面，瘦素抵抗影响胰岛素分泌和肝脏对胰岛素的敏感性，在脂肪肝、肥胖、糖尿病、代谢综合征中起着更加重要的作用¨ 。Pelleymounter MA等发现，瘦素缺陷性(ob／ob)小鼠会发展至脂肪肝并会呈现与人类非酒精性脂肪性肝病有密切关系的胰岛素抵抗(insulin resistance，IR)、肥胖及血脂异常等等；在一项临床实验中发现非酒精性脂肪肝患者血清瘦素水平显著高于正常对照组，且随着脂肪肝的严重程度增加而逐渐升高。

　　脂联素是脂肪细胞分泌的一种内源性生物活性多肽或蛋白质，是脂肪组织基因表达最丰富的产物之一，大量存在于血液循环中。StumvoLl等ll 的动物实验发现，APN可以减低小鼠餐后血清游离脂肪酸，增加肝细胞随胰岛素的敏感性，抑制肝糖元的输出；生理剂量的APN能促进小鼠肝和肌细胞脂肪酸的燃烧，改善肝及外周组织的胰岛素抵抗：APN改善胰岛素抵抗的机制可能为激活PPART和AMP激活途径，增强脂肪酸B氧化，降低三酰甘油；Yamauchi等 研究胰岛素敏感性改变的小鼠脂联素表达下降与胰岛素抵抗的相关性，发现脂联素通过降低肥胖鼠肌肉和肝脏中甘油三酯的浓度，可减轻胰岛素的抵抗。

　　活血化痰方各剂量组的血清瘦素、脂联素含量与模型组比较有显著差异(P<0．01)。从实验中可以看出瘦素、脂联素与NAFLD的发病密切相关，活血化痰方可能通过提高瘦素水平，降低脂联素水平，调节体内脂质代谢，从而使NAFLD渐愈。

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