最大化提取小鱼仙草总黄酮的方法研究-护理系毕业论文

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　　通常认为，提取溶剂越多，被浸提出来的物质就越多[12]。本实验曾对溶媒倍数进行单因素考察，结果表明，30倍量时提取得率最高，再增加溶媒倍数时反而下降。究其原因可能是溶媒倍数增加至一定值后，乙醇与药材形成竞争体系，导致药材对热能吸收减少，细胞破裂不完全，黄酮不能充分溶出[13]。同时，提取溶剂用量过大，会给过滤及蒸发浓缩工序增加困难，并且增加生产成本。故最终确定溶媒倍数以20～40倍量作为考察水平。
　　经SAS软件分析计算后可知，理论最佳回流提取工艺为：加药材 24.30倍量的浓度为 70%乙醇于 90℃水浴回流提取 2.54次，1.85 h.在此条件下，小鱼仙草总黄酮提取得率理论值为 8.78%。综合考虑实际操作的简便及实验方差分析结果，确定最佳回流提取工艺为：加药材20倍量浓度为70%乙醇，于 90℃水浴回流提取 3次，每次 1.9 h。按最佳提取工艺进行验证性实验，测定小鱼仙草总黄酮含量，计算提取得率，结果总黄酮的提取得率为8.54%，RSD= 0.47%，证明该工艺稳定，重现性好。
　　1 仪器与试药
　　WND200A型高速中药粉碎机(上海微型电机厂)、S22PC可见分光光度计(上海棱光技术有限公司)。小鱼仙草药材于2008年10月采自浙江永康，经俞冰副教授鉴定为小鱼仙草Mosla dianthera Maxim.的地上部分，阴干，粉碎，备用。芦丁标准品购自中国药品生物制品检定所(批号：10008020030)，所用试剂均为分析纯。
　　2 实验方法与结果
　　2.1 总黄酮的含量测定
　　精密称取105℃干燥恒重的芦丁对照品10.6 mg，加50 %乙醇溶解定容于50 mL容量瓶，得浓度为2.12 mgomL-1标准品溶液。精密吸取标准品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml，分别置25 ml容量瓶中，加5 % NaNO2 1.0 mL，摇匀，放置6 min后加10 % Al(NO3) 3 1.0 mL，摇匀，放置6 min后再加10 % NaOH 10 mL，加50 %乙醇稀释至25 ml，混匀，静置15 min，同行试剂作空白，于510 nm处测定吸光度[10]，以吸光度值为纵坐标，以芦丁浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A= 0.5464C + 0.0056 ，r = 0.9997，结果表明芦丁在0.212～1.272 mg范围内线性关系良好。
　　2.2 提取工艺研究
　　根据BoxBenhnken的中心组合实验设计原理，综合单因素实验结果，在选定乙醇浓度为70%、提取温度为90℃的前提下，选择溶媒倍数、提取时间和提取次数3个因素作为自变量设计响应面分析实验，分别以X1、X2、X3表示，每个自变量的低、中、高水平分别以-1、0、1进行编码，以小鱼仙草总黄酮提取得率作为响应值Y。实验因素及水平安排见表1。表1 实验因素及水平安排表
　　分别精确称取小鱼仙草干燥药材粉末 5.0 g，根据表1选择的因素和水平，70% 乙醇回流提取，过滤，加同浓度的乙醇溶液定容至250 mL，摇匀，作为供试品溶液。精密移取0.3 mL供试品溶液，测定总黄酮含量，计算总黄酮提取得率，结果见表2。表2 响应面实验安排及结果(n=3)注：共有15个实验，其中12个为析因实验，3个为中心实验以估计误差。
　　采用SAS 9.1.3软件对表2结果进行响应面回归分析，得拟合方程：Y=8.436667+0.11X1 +0.2X2 +0.2425X3-0.107083X12+0.1775X1X2 +0.0625X1X3 -0.077083X22 +0.1575X2X3-0.172083X32(R= 0.9622)。并作回归方程显著性检验及方差分析，结果见表3。表3 回归方程的显著性检验及方差分析结果.
　　由表3可知，回归方程具有显著性，且线性相关系数R在置信区间95%，说明该模型与实际实验拟合较好。可用于替代实验点对实验结果进行分析。方程中一次项对小鱼仙草总黄酮提取得率有显著性影响，二次项、交互项则无显著性影响，因此各因素与指标之间是简单的线性关系，而不是二次关系。其中，提取时间(X2)和提取次数(X3)对总黄酮提取得率有显著性影响，而溶媒倍数(X1)则无显著性影响。并作相应的等值线图和响应图，结果见图1～6。