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　　本实验在单因素考察中，分别以加酒量、炒制温度和炒制时间为影响黄柏酒制的工艺的主要因素，而闷润时间对黄柏的生物碱含量影响不大，只要超过2h小时即可。另外闷润时间也随季节而不同，夏季室温高，酒挥散的较快且较多，而到了冬季则恰恰相反，导致影响闷润时间的因素很多。所以只要在每次润药时，只要药材将酒吸尽润透即可。 加酒量、炒制温度、炒制时间对酒制黄柏的生物碱含量都有影响，且随着加酒量的增加、温度的升高和时间的延长，酒制黄柏的生物碱含量均大致呈现先升高后降低的趋势。
　　本实验认为加酒量、炒制温度、炒制时间为影响黄柏炮制的主要因素，并以三种因素进行正交设计，以盐酸小檗碱以及盐酸黄柏碱为指标，对酒制黄柏的最佳炮制工艺进行优选，筛选出最佳工艺为药材加入黄酒（每100kg药材用黄酒20kg）润透，锅底温度为150～160℃，炒制6min。本实验结果为进一步探讨酒制黄柏的炮制作用，制定黄柏酒制品的质量标准提供了参考依据。
　　1  仪器与试药
　　1.1 仪器
　　安捷伦1100-series液相色谱仪（G1314A紫外检测器）；METTLER AE240型十万分之一分析天平（瑞士METTLER），KQ-250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），FA1004B电子天平（上海精密科学仪器有限公司），烘箱（WS70B-型）。
　　1.2 药材
　　黄柏药材，购自四川省药材公司，经辽宁中医药大学要用植物教研室王冰教授鉴定为芸香科植物黄皮树Phellodendron chinense Schneid.的干燥树皮。
　　1.3 试剂与试药
　　乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
　　盐酸小檗碱对照品购自中国药品生物制品检定所（批号0713-9906）。
　　盐酸黄柏碱对照品购自成都曼思特生物技术有限公司，供含量测定使用，纯度均大于98 %。
　　黄酒（绍兴市古泉酿酒厂，批号20060926，酒精度9%）。
　　2  方法与结果
　　2.1 盐酸小檗碱和盐酸黄柏碱的含量测定
　　2.1.1 盐酸小檗碱的含量测定
　　对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品9.52mg, 置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1mL含盐酸小檗碱0.0952mg的对照品溶液。论文大全网WWW.11665.COM整理。
　　供试品溶液的制备：称取不同条件下炮制品粉末约0.1g，精密称定，制50mL容量瓶中，加甲醇约40mL，超声处理（功率250W，频率40kHz）40 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，既得。
　　色谱条件：色谱柱TC-C18（150mm×4.6mm，安捷伦）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（体积比1：1）（每100mL加十二烷基硫酸钠0.1g），检测波长为265nm；流速：1mL/min；柱温为30℃。理论板数按盐酸小檗碱计算应不低于4000[1]。
　　2.1.2 盐酸黄柏碱的含量测定
　　对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品0.415mg, 置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1mL含盐酸小檗碱0.00415mg的对照品溶液。
　　供试品溶液的制备：称取不同条件下炮制品粉末精密称定0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入1%醋酸甲醇25mL，超声处理（功率250W，频率40kHz）30 min，放凉，再称定重量，用1%醋酸甲醇补足减失的重量，摇匀，摇匀，取续滤液，即得。
　　色谱条件：色谱柱TC-C18（150mm×4.6mm，安捷伦）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（40：60）（每100ml加十二烷基硫酸钠0.2g），检测波长为284nm；流速：1.0ml/min；柱温为30℃，进样量为5μl。理论板数按盐酸黄柏碱计算应不低于6000[1]。
　　2.2 单因素实验考察
　　2.2.1 加酒量的考察
　　取黄柏饮片5份，每份20g，分别加入黄酒（每100kg药材分别用黄酒10kg、15kg、20kg、25kg）至密闭容器内，闷润4h后，在温度为150～160℃下炒制5分钟后出锅，放凉，备用。
　　结果表明，不同的加酒量下，盐酸小檗碱和盐酸黄柏碱的含量有所不同，说明，加酒量是影响黄柏生物碱的主要因素。且从表2可以看出，在加酒量为每100kg药材用黄酒20kg是，生物碱的综合评分最高，因此每100kg药材用黄酒20kg进行下一组单因素考察。 上式X为盐酸小檗碱含量， Y为盐酸黄柏碱含量，并对黄柏酒制品的综合评分的两个指标的参数各设为50%，下同。
　　2.2.2 闷润时间的考察
　　取黄柏5份，每份20g，加入黄酒（按每100kg药材用黄酒20kg）至密闭容器内，分别闷润1h、2h、4h、6h、8h后，在温度为150～160℃下，分别炒制5min后出锅，放凉，备用。
　　由以上方差分析结果可以得出，酒制黄柏的影响因素为C（炒制时间）>B（炒制温度）>A（加酒量），且B因素和C因素对黄柏酒炙生物碱的含量有显着的影响，而A因素对黄柏酒炙的生物碱含量无显着影响。结合直观分析表并考虑生产实际，确定其炮制的最佳工艺为A2B2C3,即药材加入黄酒（每100kg药材用黄酒20kg）润透，锅底温度为150～160℃，炒制6min。