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　　1  仪器与试药
　　贯叶金丝桃Hypericum perforatum L.购自亳州九方药材公司,产地为四川古蔺地区,安徽中医学院药学院中药教研室潘鲁敏副教授鉴定为藤黄科金丝桃属植物贯叶金丝桃的上枝叶。金丝桃苷对照品购于中国药品生物制品检定所(批号111521-200303)。乙醇购自合肥酒精厂,其他试剂均为分析纯,重蒸馏水自制。
　　2  含量测定
　　2.1  金丝桃苷含量测定
　　采用高效液相色谱法测定金丝桃苷的含量，计算金丝桃苷提取率。
　　2.1.1  对照品溶液的制备
　　精密称取干燥至恒重的金丝桃苷对照品5.2 mg,置25 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,制成0.208 mg/mL金丝桃苷对照品溶液。
　　2.1.2  供试品溶液的制备
　　取贯叶金丝桃提取物约40 mg,精密称定,加甲醇溶解后滤过,定容至50 mL量瓶中,制成供试品溶液。
　　2.1.3  标准曲线的绘制
　　精密吸取金丝桃苷对照品溶液0.5、1、2、3、4 mL,分别用甲醇定容至10 mL,制得系列对照品溶液。分别进样20 μL,记录峰面积值Y,以C为横坐标,Y为纵坐标,得回归方程：Y＝175 233C＋9 464.6,r＝0.999 9,说明金丝桃苷在10.4～83.2 μg/mL范围内具有良好的线性关系。
　　2.1.4  精密度试验
　　取同一份对照品溶液,浓度为20.8 μg/mL,进样20 μL,重复6次,测定峰面积,结果RSD＝1.47%,说明精密度良好。取同一批贯叶金丝桃药材提取物6份,制备样品溶液,分别进样20 μL,测得峰面积RSD＝1.36%,表明该法重复性较好。取供试品溶液,分别在0、2、4、6、8 h进样20 μL,测定峰面积,RSD＝1.24%,结果表明在8 h内样品溶液稳定性较好。精密称取已知金丝桃苷含量的贯叶金丝桃提取物40 mg,精密加入金丝桃苷对照品(0.235 mg/mL) 5 mL,依法制备供试品溶液。分别进样20 μL测定峰面积,计算回收率,结果见表1。
　　2.1.8  样品含量测定
　　按供试品溶液制备方法制备样品溶液,精密吸取20 μL,注入高效液相色谱仪,测定金丝桃苷含量,见图1,计算金丝桃苷的提取率。
　　2.2  总黄酮含量测定
　　采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法测定贯叶金丝桃总黄酮含量,计算总黄酮提取率。
　　3  正交试验
　　取100 g贯叶金丝桃(其中金丝桃苷含量为7.12 mg/g,总黄酮为48.58 mg/g)碎成粗粉,用乙醇加热回流提取,过滤,滤液减压回收乙醇至无醇味,加沸水1 000 mL溶解,冷却,过滤,浓缩,干燥,得到贯叶金丝桃提取物,并进行含量测定。以总黄酮的提取率和金丝桃苷的提取率为指标,采用正交设计对贯叶金丝桃总黄酮的提取工艺条件进行优选。根据文献和预试验结果,选择醇浓度(A)、溶媒用量(B)、提取时间(C)、提取次数(D)4个试验因素,每个因素3个水平,按L9(34)正交表进行试验,因素水平安排见表3。