国内医学核心期刊   医学核心期刊目录    2012医学核心期刊    医学论文写作
　　1  实验材料
　　1.1  药品与试剂
　　双氢青蒿素对照品(批号100184-200401,中国药品生物制品检定所提供),双氢青蒿素原料药(批号20050704,购自重庆华立武陵山制药有限公司)。水为高纯水,甲醇及乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。
　　1.2  动物
　　Wistar大鼠,体重200 g左右,购自中国医学科学院实验动物研究所,动物合格证号：SCXK(京)2005－0013。
　　1.3  仪器
　　高效液相色谱仪(Waters2695,美国),检测器(Waters2996,美国),透皮扩散试验仪
　　2  方法与结果
　　2.1  体外透皮试验方法学考察
　　2.1.1  色谱条件[2]
　　Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-水(60∶40)；流速：1 mL/min；检测波长：216 nm；柱温：25 ℃。在该色谱条件下DHA与其他成分能达到基线分离,阴性对照无干扰,见图1。
　　2.1.2  对照品溶液的配制
　　精密称定DHA对照品10.13 mg,置10 mL量瓶中,加适量甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得对照品贮备液(1.013 mg/mL)。
　　2.1.3  供试品溶液的制备
　　取DHA样品涂于已处理好的大鼠皮肤上,做体外透皮试验,接受液经0.45 μm微孔滤膜滤过,即得供试品溶液。
　　2.1.4  阴性对照溶液的制备
　　取不含DHA的阴性对照样品,按“2.1.3”项下方法操作,即得阴性对照溶液。
　　2.1.5  标准曲线的建立
　　精密吸取对照品贮备液,用接受液定容,配制一系列不同浓度的溶液(0.025 325、0.050 65、0.101 3、0.202 6、0.405 2、0.759 75、1.013 mg/mL)。精密吸取上述溶液各10 μL,分别注入液相色谱仪,记录峰面积。以DHA峰面积为纵坐标,进样量(μg)为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程：Y＝311 707.799 4X－1 355.167 2,r＝0.999 9。结果表明,DHA在0.253 25～10.13 μg范围内线性关系良好。
　　2.1.6  精密度试验
　　取供试品溶液,重复进样6次,以DHA含量计算,RSD＝0.64%。
　　2.1.7  稳定性试验
　　取供试品溶液,分别于0、4、8、12、16、20、24、48、56 h进样10 μL,测定,以DHA含量计算,RSD＝0.95%。样品在取样后2 d内完成含量测定,保证样品的稳定性。
　　2.1.8  回收率试验
　　取阴性对照溶液,按一定比例加入DHA对照品溶液(1.013 mg/mL),配制成浓度为0.050 65、0.202 6、0.506 5 mg/mL的溶液,以DHA含量计算,求得平均回收率为98.67%(n＝9),RSD＝2.04%。
　　2.2.2  体外透皮试验
　　2.2.2.1  皮肤处理
　　大鼠处死后,用电动剔毛器将其剔毛后,取其腹部皮肤,去除脂肪层,用生理盐水洗涤,备用。
　　2.2.2.2  试验条件
　　试验装置为改良的Franz扩散池；水浴温度为(37±1)℃；磁子转速为(400±5)r/min；接受液为20%乙醇生理盐水；接受液体积约为6 mL；释放面积约为2.92 cm2。
　　2.2.2.3  试验方法
　　将DHA样品涂在大鼠皮肤角质层上,在设定的时间取样,全部取出接受液,每次取样后重新注满接受液,并排除接受室中的气泡。
　　2.2.3  结果
　　以单位面积DHA累积透过量作体外透皮曲线图,并处理回归Higuchi方程及计算透皮速率J[3],见图2、表1。结果表明,透皮速率以卡波普水溶性软膏为最高,回归方程线性较好,且软膏均匀、细腻、涂展性好,故选择卡波普水溶性软膏为DHA的处方。以卡波普水溶性软膏为DHA处方基质,加入一定促渗剂,制成软膏。按照“2.2.2”条件和方法操作,分别于3、6、9、12、24 h取样,按照“2.1.3”方法处理,测定DHA峰面积,计算单位面积DHA累积透过量,并作体外透皮释放曲线图及对曲线进行直线回归,见图3、表2。以上试验表明,含有促渗剂比不含促渗剂的DHA软膏的体外透皮速率高,而又以含有氮酮的最高,且回归方程线性较好,故选择氮酮为DHA软膏的促渗剂。