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　　1  仪器与试药
　　1.1  仪器高效液相色谱仪（DionexP680 美国戴安），旋转蒸发器（buchi 瑞士），超纯水器（Millipore美国），超声清洗器（AS5150A 天津，功率：180W，频率：40KHz），电子天平（Sartorius BS224S 北京）。
　　1.2  试药与试剂常春藤皂苷元（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号111733-200501），齐墩果酸（中国药品生物制品检定所，批号110709-200505），甲醇（色谱纯，Fisher），水为超纯水及重蒸水，其余试剂均为分析纯。
　　1.3  样品采自阿坝州，经成都中医药大学卫莹芳教授鉴定为红毛五加Acaothopanax giraldii Harms 的干燥叶。
　　2  方法与结果
　　2.1  红毛五加叶的薄层鉴别文献报道，红毛五加中含有常春藤皂苷及齐墩果酸皂苷［2］，因此，本研究对常春藤皂苷元和齐墩果酸进行了定性鉴别。
　　取常春藤皂苷元对照品、齐墩果酸对照品，加甲醇制成每毫升各含0.4 mg的混合溶液，作为对照品溶液。取本品粉末（过4号筛）约2 g，精密称定，加甲醇50 ml，超声处理30 min，滤过，残渣用甲醇适量洗涤，合并滤液与洗液，回收溶剂至干，残渣加水10 ml溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3次，20 ml/次，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇20 ml，盐酸1 ml，加热水解4 h，水解物加水10 ml，用三氯甲烷振摇提取2次，20 ml/次，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加甲醇2 ml溶解，即得供试品溶液。吸取供试品溶液、对照品溶液各2～5 μl，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯-冰醋酸（6∶4∶0.25）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与常春藤皂苷元对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的深蓝色斑点；在与齐墩果酸对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的蓝紫色斑点。
　　2.2  红毛五加叶中常春藤皂苷元含量测定
　　2.2.1  色谱条件色谱柱为Welchrom-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）。流动相为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（85∶15∶0.04∶0.02）。检测波长210 nm，柱温35℃，体积流量1.0 ml·min-1，进样量10 μl。色谱柱理论塔板数以常春藤皂苷元峰计算，不得低于2 000。
　　2.2.2  对照品溶液的制备精密称取减压真空干燥至恒重的常春藤皂苷元对照品34.2 mg，置于100 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成0.342 mg/ml的对照品溶液。
　　2.2.3  供试品溶液的制备取本品粉末（过4号筛）约2 g ，精密称定，加甲醇50 ml，回流提取30 min，滤过，残渣用甲醇适量洗涤，合并滤液和洗液，回收溶剂至干，残渣加水10 ml溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3次，20 ml/次，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇20 ml，盐酸1 ml，加热水解4 h，水解物加水10 ml，用三氯甲烷振摇提取2次，20 ml/次，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
　　2.2.4  标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液2，4，8，16，32 μl进样分析，测定常春藤皂苷元的峰面积，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得常春藤皂苷元的回归方程为Y= 7.228 4X -0.023 2（r=1.000 0），其进样量在0.68 ～10.94 μg范围内呈良好的线性关系。
　　2.2.5  精密度实验精密吸对照品溶液10 μl进样，连续进样5次，记录峰面积，计算峰面积的RSD值为1.07%，表明仪器精密度较好。
　　2.2.6  重复性实验取本品粉末（过4号筛），按“2.2.3”项下制备供试品溶液6份，进样分析，测得样品中常春藤皂苷元平均含量为10.17 mg·g-1，RSD为1.14％，表明方法重复性良好。
　　2.2.7  稳定性实验精密吸取同一供试品溶液10 μl，分别于0，2，4，8，12，24 h进样分析，测得峰面积的RSD值为0.97％，表明供试品溶液在24 h内稳定。
　　2.2.8  加样回收率实验取已测定含量的样品粉末约 0.5 g，精密称定6份，分别精密加入对照品溶液14.9 ml和甲醇10.1 ml，制备方法参照“2.2.3”项下，试剂均减半，残渣加甲醇溶液溶解，转移至25 ml容量瓶中，定容，即得。进样分析，计算得常春藤皂苷元的平均回收率为100.42%，RSD值为1.71%。样品测定按上述方法对不同来源样品进行测定，外标法计算常春藤皂苷元的含量。