尖锐湿疣(condyloma acuminatum，CA)是全球范围广泛流行的性传播疾病之一，由人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染所致。近十年来，我国CA患者逐年增多，仅次于淋病。为深入了解CA患者HPV的感染情况和型别分布，我们采用荧光定量聚合酶链反应(FQ—PCR)法对我院CA患者HPV DNA进行高低危分型检测，现将结果作一报道。

 

　　1 资料与方法

 

　　1．1 研究对象2011年5月至2012年l0月在本院泌尿外科、妇产科及皮肤性病门诊就诊的110例CA患者，其中男56例(50．91％)，女54例(49．09％)；年龄16～82岁。

 

　　1．2 标本采集对于疣体组织明显的CA患者，剪取其疣体组织；对于无疣体或疣体不明显的CA患者，取无菌棉拭子，用0．9％氯化钠注射液湿润后，擦拭病变部位或疑似部位。将取样后的疣体组织放人干燥无菌试管中，棉拭子标本洗脱在1ml无菌0．9％氯化钠注射液试管中，均放人一20℃冰箱保存待测。

 

　　1．3 实验仪器及试剂 FQ—PCR采用ABI7500型核酸检测仪，试剂盒为低危型(HPV6、HPV11)和高危型(HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV45、HPV52、HPV56、HPV58，共8型)两种，由中山大学达安基因股份有限公司生产。

 

　　1．4 方法

 

　　1．4．1 核酸提取取出待测样本于室温解冻，对于疣体组织，转入1．5 ml离心管中，用眼科剪将其剪碎，直接加入50 l DNA提取液混匀，100℃恒温裂解10 rain，12 000 r／min离心5 min，待用。取待检分泌物，解冻后振荡混匀数秒，转入1．5 ml的离心管中，12 000 r／min离心10 min，弃上清液，在沉淀中加入50 l DNA提取液混匀，100 oC恒温裂解10 min，12 000 r／rain离心5min，待用。

 

　　1．4．2 FQ-PCR 取核酸提取上清液5 l加入PCR反应体系中，8 000 r／rain离心数秒，放入仪器样品槽中进行PCR实验。反应循环条件为93℃ 2 min，93 45 s一55 qC 60 s一10个循环，93℃ 30 s一55℃45s一30个循环，然后存盘、运行、分析结果。

 

　　1．5 统计学方法采用x检验和秩和检验。

 

　　2 结果110例CA患者中，HPV的阳性检出率为100．00％。其中单一低危HPV检出率为64．55％(71／110)；单一高危HPV 检出率为14．55％(16／110)；高低危复合型检出率为20．91％(23／110)。不同性别和年龄患者HPV检出率差异均无统计学意义(P>0．05)(见表1)引起重视，在对CA患者治疗的同时应进行HPV分型检测，可以尽早对高危型HPV感染者进行筛查、治疗及定期随访，对预警癌变、降低生殖道肿瘤的发生具有重要意义。另外，高危HPV感染型别也日渐增多，在对HPV16、HPV18感染进行筛选时，应考虑其他型别的高危感染，以免漏诊。

 

　　有研究 表明，CA的发病与年龄有关，年龄是CA发病的独立危险因素。本研究结果表明：2l～50岁(性活跃期)为CA的高发年龄段，占86．36，可见，性活跃期人群更易感染HPV。各年龄段HPV检出率差异无统计学意义(P>0．05)，与国内报道Ⅲ5 相似，提示HPV感染无性别倾向。虽然靠人体强大的免疫系统可以清除大部分的病毒，但是少部分未清除的病毒持续感染将会导致CA或生殖器恶性肿瘤等疾病 。由于目前没有较为有效的治疗措施，预防性的疫苗就显得至关重要，可能会减少HPV感染及与其相关的某些疾病的发生。

 

　　本研究采用的FQ．PCR技术是近年来发展起来的新技术，具有高灵敏度、高特异性和定量精确等优，能早期发现HPV感染和型别，对临床有较早的早期诊断价值。

 

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